詳細(xì)內(nèi)容

產(chǎn)品名稱：豬急性腹瀉綜合征冠狀病毒熒光RT-PCR檢測試劑盒

規(guī) 格：50T/盒
反應(yīng)體積：25μL
試劑類型：液體

【預(yù)期用途】

本試劑盒適用于檢測豬急性腹瀉綜合征冠狀病毒(SADS-CoV)的RNA，用于豬急性腹瀉綜合征冠狀病毒(SADS-CoV)感染的輔助診斷，其檢測結(jié)果僅供參考。本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，僅提供人工合成的特異性DNA///片段標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對照，僅限于業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療用途。

【儲存、有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融少于7次，有效期12個月。

【技術(shù)原理】

采用TaqMan一步法熒光定量RT-PCR技術(shù)，結(jié)合特異性擴(kuò)增引物對目的基因進(jìn)行體外擴(kuò)增，本試劑盒具有靈敏性高、特異性強(qiáng)、反應(yīng)時間短等優(yōu)點(diǎn)，操作簡便，污染概率低等特點(diǎn)。

【使用方法】

一、試劑準(zhǔn)備（在試劑準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行）

1. 取出包裝盒中的各組分，室溫放置，待其完全融化，混勻后備用。

2. 根據(jù)待測樣本、陰性對照、陽性對照的數(shù)量，按下表1單反應(yīng)體系配制方法，取相應(yīng)量的試劑，充分混勻成PCR-Mix，按照20 μL/反應(yīng)分裝到PCR反應(yīng)管中，瞬時離心后備用。

表1：單反應(yīng)體系配制方法

二、樣本準(zhǔn)備（在樣本準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行）

1. 使用商品化的病毒核酸提取試劑盒，參照說明書進(jìn)行操作，提取好的核酸樣本如不能立即檢測，建議-70℃以下保存。

2. 取出樣本后混勻，將陰性對照、待測樣本、陽性對照各5 μL加入到PCR反應(yīng)管中混勻。

3. 蓋上管蓋，2000 rpm離心30。

4. 將PCR反應(yīng)管轉(zhuǎn)移到擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行上機(jī)。

三、PCR（在核酸擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行）

1. 將上述PCR反應(yīng)管按照實(shí)驗(yàn)布局依次放入PCR儀對應(yīng)檢測孔內(nèi)，并記錄順序。

2. 按表2設(shè)置PCR擴(kuò)增循環(huán)參數(shù)。

表2：PCR擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)

【結(jié)果分析】

表3：結(jié)果分析表

【注意事項(xiàng)】

1. 使用本試劑盒的實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)嚴(yán)格按照國家有關(guān)基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范進(jìn)行管理。

2. 各區(qū)域物品均為用，不得交叉使用，以免污染。檢測結(jié)束后，應(yīng)立即對工作臺進(jìn)行清潔消毒。

3. 吸取反應(yīng)液時，應(yīng)盡量避免產(chǎn)生氣泡。上機(jī)，應(yīng)注意檢查各反應(yīng)管是否蓋緊，以免液體蒸發(fā)造成結(jié)果不準(zhǔn)確。

4. 檢測過程中使用過的吸頭，應(yīng)直接打到盛有10%次氯酸的廢液缸內(nèi)，檢測結(jié)束的PCR反應(yīng)管，切忌開蓋，并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄。

5. 工作臺及各種實(shí)驗(yàn)用品應(yīng)定期用10%次氯酸、75%酒精或紫外燈進(jìn)行消毒。

6. 試劑使用應(yīng)在常溫下充分融化并混勻。不同批號的試劑請勿混用，并在有效期內(nèi)使用。

【儲存條件與有效期】

試劑盒應(yīng)置于-20℃冷凍避光貯存；

試劑盒保存有效期為12個月；

試劑盒反復(fù)凍融次數(shù)不宜超過5次。

原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司

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