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詳細內容

豬德爾塔冠狀病毒熒光RT-PCR檢測試劑盒

點擊次數:524  發布時間:2024/11/18

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公司名稱:上海遠慕生物科技有限公司 型 號: 生產地址:中國大陸 已獲點擊:524 簡單介紹: 豬德爾塔冠狀病毒熒光RT-PCR檢測試劑盒,本產品僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的,不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用。
詳細內容

通用名稱:豬德爾塔冠狀病毒熒光PCR檢測試劑盒(實時熒光PCR法)

英文名稱:Porcine deltacorona virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包裝規格】 50T/盒

【預期用途】

本試劑盒利用實時熒光PCR原理,定性檢測豬德爾塔冠狀病毒,對豬德爾塔冠狀病毒引起的豬的診斷和監控具有重要指導意義。

【原    理】

豬德爾塔冠狀病毒熒光PCR檢測試劑盒針對豬德爾塔冠狀病毒高度保守區域設計特異性引物和探針,在反應體系中含豬德爾塔冠狀病毒基因組模板的情況下,PCR反應得以進行并釋放熒光信號。利用儀器對PCR過程中相應通道的信號強度進行實時監測和輸出,實現檢測結果的定性分析。

【試劑盒組成】

序號

組成

50T/盒

1

  PDCoV  RT-PCR反應液

875 μL×1管

2

PDCoV 混合酶液

125 μL×1管

3

PDCoV 陽性對照

 40 μL×1管

4

PDCoV 陰性對照

 40 μL×1管

5

說明書

1份

注:陰性對照為滅菌純水,陽性對照為含豬德爾塔冠狀靶基因的質粒。

【使用方法】

一、試劑準備(在試劑準備區進行)

1. 取出包裝盒中的各組分,室溫放置,待其完全融化,混勻后備用。

2. 根據待測樣本、陰性對照、陽性對照的數量,按下表1單反應體系配制方法,取相應量的試劑,充分混勻成PCR-Mix,按照20 μL/反應分裝到PCR反應管中,瞬時離心后備用。

表1:單反應體系配制方法

試劑

反應液

混合酶

用量

19 μL

1 μL

二、樣本準備(在樣本準備區進行)

1. 使用商品化的病毒核酸提取試劑盒,參照說明書進行操作,提取好的核酸樣本如不能立即檢測,建議-70℃以下保存。

2. 取出樣本后混勻,將陰性對照、待測樣本、陽性對照各5 μL加入到PCR反應管中混勻。

3. 蓋上管蓋,2000 rpm離心30

4. 將PCR反應管轉移到擴增區進行上機。

三、PCR(在核酸擴增區進行)

1. 將上述PCR反應管按照實驗布局依次放入PCR儀對應檢測孔內,并記錄順序。

2. 按表2設置PCR擴增循環參數。

表2:PCR擴增相關參數

體系

反應體系設為25 μL

信號采集

選擇FAM通道檢測H5亞型;

選擇CY5通道檢測H7亞型;

選擇ROX通道檢測H9亞型。

PCR

反應

條件

階段

條件

循環數

逆轉錄

50℃:30 min

1

預變性

95℃:5 min

1

PCR

95℃:15 sec

45

60℃:30 sec

(此階段結束時采集熒光信號)

 

【結果分析】

表3:結果分析表

實驗成立

條件

陰性對照

三通道Ct>38或者No Ct,線形為直線或輕微斜線,無指數增長期。

陽性對照

三通道Ct≤30且出現典型的S型擴增曲線。

樣本結果

判定標準

H5亞型

陽性

FAM通道Ct≤35且出現典型的S型擴增曲線。

H7亞型

陽性

CY5通道Ct≤35且出現典型的S型擴增曲線。

H9亞型

陽性

ROX通道Ct≤35且出現典型的S型擴增曲線。

 

結果可疑

任一通道35<Ct≤38,建議復測,復測結果仍為可疑,且出現明顯指數增長,判為陽性。否則為陰性。

結果陰性

Ct>38或者No Ct,線形為直線或輕微斜線,無指數增長期。

【注意事項】

1. 使用本試劑盒的實驗室,應嚴格按照國家有關基因擴增檢驗實驗室管理規范進行管理。

2. 各區域物品均為用,不得交叉使用,以免污染。檢測結束后,應立即對工作臺進行清潔消毒。

3. 吸取反應液時,應盡量避免產生氣泡。上機,應注意檢查各反應管是否蓋緊,以免液體蒸發造成結果不準確。

4. 檢測過程中使用過的吸頭,應直接打到盛有10%次氯酸的廢液缸內,檢測結束的PCR反應管,切忌開蓋,并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄。

5. 工作臺及各種實驗用品應定期用10%次氯酸、75%酒精或紫外燈進行消毒。

6. 試劑使用應在常溫下充分融化并混勻。不同批號的試劑請勿混用,并在有效期內使用。

【儲存條件與有效期】

試劑盒應置于-20℃冷凍避光貯存;

試劑盒保存有效期為12個月;

試劑盒反復凍融次數不宜超過5次。

 

原創作者:上海遠慕生物科技有限公司


標簽:豬德爾塔冠狀病毒熒光RT-PCR檢測試劑盒   PCR試劑盒   
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