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【產品名稱】豬瘟病毒通用型熒光RT-PCR 檢測試劑盒(熒光RT-PCR法)

【包裝規格】50T/盒

【預期用途】

  本試劑盒適用于檢測的扁桃體、淋巴結等組織病變部與健康部交界處組織、全血等標本中豬瘟病毒通用型RNA，適用于豬瘟病毒通用型感染的輔助診斷。

【檢驗原理】

  本試劑盒采用TaqMan探針法實時熒光PCR技術，通過設計一對禽豬瘟病毒通用型特異性引物，結合一條特異性探針，用熒光PCR技術對豬瘟病毒通用型的核酸進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。

【使用方法】

一、試劑準備（在試劑準備區進行）

1. 取出包裝盒中的各組分，室溫放置，待其完全融化，混勻后備用。

2. 根據待測樣本、陰性對照、陽性對照的數量，按下表1單反應體系配制方法，取相應量的試劑，充分混勻成PCR-Mix，按照20 μL/反應分裝到PCR反應管中，瞬時離心后備用。

表1：單反應體系配制方法

二、樣本準備（在樣本準備區進行）

1. 使用商品化的病毒核酸提取試劑盒，參照說明書進行操作，提取好的核酸樣本如不能立即檢測，建議-70℃以下保存。

2. 取出樣本后混勻，將陰性對照、待測樣本、陽性對照各5 μL加入到PCR反應管中混勻。

3. 蓋上管蓋，2000 rpm離心30。

4. 將PCR反應管轉移到擴增區進行上機。

三、PCR（在核酸擴增區進行）

1. 將上述PCR反應管按照實驗布局依次放入PCR儀對應檢測孔內，并記錄順序。

2. 按表2設置PCR擴增循環參數。

表2：PCR擴增相關參數

【結果分析】

表3：結果分析表

【注意事項】

1. 使用本試劑盒的實驗室，應嚴格按照國家有關基因擴增檢驗實驗室管理規范進行管理。

2. 各區域物品均為用，不得交叉使用，以免污染。檢測結束后，應立即對工作臺進行清潔消毒。

3. 吸取反應液時，應盡量避免產生氣泡。上機，應注意檢查各反應管是否蓋緊，以免液體蒸發造成結果不準確。

4. 檢測過程中使用過的吸頭，應直接打到盛有10%次氯酸的廢液缸內，檢測結束的PCR反應管，切忌開蓋，并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄。

5. 工作臺及各種實驗用品應定期用10%次氯酸、75%酒精或紫外燈進行消毒。

6. 試劑使用應在常溫下充分融化并混勻。不同批號的試劑請勿混用，并在有效期內使用。

【儲存條件與有效期】

試劑盒應置于-20℃冷凍避光貯存；

試劑盒保存有效期為12個月；

試劑盒反復凍融次數不宜超過5次。

原創作者：上海遠慕生物科技有限公司

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