詳細內容

一、貨號：CR2638（50mL純化量）

二、試劑原理：

本試劑盒利用不同蛋白需要的沉淀試劑和沉淀條件不同，通過大量實驗分析驗證而得到的一個與傳統沉淀純化相比有較大不同的精細的具有高活性、高產率、快速以及良好重復性的單克隆抗體的純化方法。

三、試劑特點：

本試劑盒特點在于純化操作的簡單化、所得抗體保持高活性和較高純度。實驗表明，本試劑盒可以得到90%以上純度的抗體；并且由于配方考究，抗體在純化過程中幾乎沒有損傷，完全保持應有的活性；實際應用好。

四、適用范圍：

本試劑盒適用于小鼠IgM類單克隆抗體腹水的純化，不能用于IgG和IgA類單克隆抗體腹水的純化實驗，如需要可選擇本公司其它貨號的純化試劑，它能為您帶來良好的結果。

五、試劑組成：

六、純化步驟：

1、 從冰箱中取出試劑盒放置室溫恢復溫度30分，期間可將單克隆抗體腹水從冰箱中取出，室溫避光復溫15分鐘，隨后用自來水邊沖邊搖勻快速解凍。

2、 將化開的單克隆抗體腹水8000-12000RPM 室溫 離心10分鐘。

3、 先吸棄上面浮沫和油脂，然后將上清轉出到另一個干凈容器或離心管；按每1毫升單克隆抗體腹水加入純化液A（加確定沒有試劑析出，如有析出搖晃溶解即可） 1毫升（必須精確），室溫避光倒轉30分。

4、 8000RPM 室溫離心10-20分鐘，沉淀用純化液B溶解到原單克隆抗體腹水1/2體積，再按此體積每1毫升加入純化液C （加確定沒有試劑析出，如有析出搖晃溶解即可）1毫升（（必須精確），室溫避光倒轉10分鐘。

5、 8000RPM  室溫離心10-20分鐘，棄沉淀收集上清；每1毫升上清液加純化液D（加確定沒有試劑析出，如有析出搖晃溶解即可）  1毫升（必須精確），室溫避光倒轉20分鐘。

6、 8000RPM 室溫離心10-20分鐘，收集沉淀用純化液B收集溶解沉淀到原單克隆抗體腹水體積的1/3。透析袋用純水浸泡5分鐘，然后用手揉捏數次，接純水沖洗干凈，抗體放入扎好。透析液用純水溶解透析試劑到8L（也可先溶解到400ML，用時20X稀釋），將要透析的抗體袋子放入。抗體體積：透析液體積=1:100，4℃透析過夜。收集透析后抗體。

7、 以透析后抗體體積：純化液E的體積=9：1的比例加入純化液E搖勻（也就是9體積抗體加1體積純化液E），靜置5min。8000RPM  室溫離心10分鐘，棄沉淀收集上清即為純化好的抗體。

8、 將純化好的抗體放入用透析夾或繩扎緊。抗體體積：透析液體積=1:50以上；4℃透析，中間換液三次，透析總時間不超過24小時。然后8000RPM 室溫離心10分鐘，收集上清測蛋白濃度并調控在5mg/ml左右后加10/萬NaN3防腐并除菌過濾-20℃備用。

七、 注意事項：

1、 溶血嚴重和腐敗的腹水不得用于純化。

2、 離心溫度不要超過37℃。

3、 操作和量取試劑要細致精準,否則影響純度。

4、 不攪拌透析每次靜置透析時間不得低于4小時。

5、 如覺得透析太慢可以選擇超濾管。

原創作者：上海遠慕生物科技有限公司

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