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戊二醛固定劑的功能及作用特點(diǎn)
閱讀次數(shù)：247 發(fā)布時(shí)間：2025/4/24 9:49:17

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戊2醛是一種五碳醛，含有兩個(gè)醛基。分子式為$C_5H_8O_2$，分子量為100。電鏡固定通常用市售的25%的戊2醛水溶液稀釋成需要的濃度。其pH為4.0$sim$5.0。氧氣、高溫、中性或堿性pH均能使戊2醛發(fā)生聚合失去醛基，并降低交聯(lián)效力，所以平時(shí)這種原液應(yīng)保存在低溫處。此外戊2醛存放時(shí)間過(guò)長(zhǎng)時(shí)，pH值會(huì)降低，顏色變黃，固定效力也大大降低，若戊2醛pH值降至3.5以下或含有其它雜質(zhì)時(shí)，必須純化后才能使用。戊2醛對(duì)皮膚有硬化作用，但它的揮發(fā)性較甲醛弱，好能在通風(fēng)櫥中操作。

戊2醛作為固定劑有如下特點(diǎn)：

它的反應(yīng)速度快，是優(yōu)良的固定劑。但它的滲透速度較慢，必要時(shí)配合甲醛使用效果更佳。

它是蛋白質(zhì)的強(qiáng)固定劑。它能快速而不可逆地與氨基反應(yīng)，和甲醛相似，戊2醛的一個(gè)醛基與氨基反應(yīng)，脫水后生成不穩(wěn)定的Schiff鍵化合物。

由于戊2醛有兩個(gè)醛基，它可以通過(guò)與相鄰的另一氨基反應(yīng)，而產(chǎn)生交聯(lián)作用。戊2醛的兩個(gè)醛基也可能與同一氨基作用，形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)

這種環(huán)狀結(jié)構(gòu)可以進(jìn)一步與另一戊2醛反應(yīng)，生成丁間醇c醛冷凝物(Aldol condensate)。這種化合物與氧分子共同作用，生成穩(wěn)定的嘧啶類衍生物(Pyridine derivatives)，并在此過(guò)程中發(fā)生交聯(lián)。

固定劑與甲醛不同，戊2醛的這一步反應(yīng)是不可逆的，而且需要氧氣的參與。由于大塊的樣品內(nèi)部氧氣供應(yīng)不足，戊2醛在大塊樣品的內(nèi)部無(wú)法形成穩(wěn)定的生成物，會(huì)導(dǎo)致樣品內(nèi)部的固定效果不佳。因而在使用戊2醛固定時(shí)，小塊的樣品固定效果較為理想。戊2醛通過(guò)交聯(lián)作用固定蛋白質(zhì)的過(guò)程會(huì)伴隨氫離子的釋放，使樣品pH值降低。為了維持pH值穩(wěn)定在佳水平，在戊2醛的固定劑中要加入足量的緩沖液。

戊2醛能通過(guò)固定核蛋白來(lái)固定組織和細(xì)胞中的DNA和RNA，能保存糖原，也可以固定和蛋白質(zhì)有關(guān)聯(lián)的或含有氨基和亞氨基的脂類。但是只使用戊2醛固定的樣品無(wú)法阻止后面的脫水、滲透和包埋過(guò)程對(duì)樣品脂類的抽提，因而對(duì)細(xì)胞膜的固定效果不理想。

戊2醛在固定過(guò)程中并不完全破壞細(xì)胞膜的半透膜特性，因而需要選擇合適的固定液滲透壓，以免造成固定假象。但合適的固定液滲透壓隨被固定細(xì)胞和緩沖液的種類改變，很難找到一個(gè)通用的滲透壓。在實(shí)際操作中，$1.0%-2.5%$戊2醛（使用0.1M磷酸鹽緩沖液或0.1M二甲胂s酸鹽緩沖液）在一般情況下，已經(jīng)能提供理想的固定效果。除非觀察到明顯的滲透壓造成的假象，一般不對(duì)固定液門進(jìn)行滲透壓調(diào)節(jié)。

用戊2醛固定的樣品不易變脆，可以進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間固定（但好不要超過(guò)一個(gè)星期），因而適用于遠(yuǎn)離實(shí)驗(yàn)室或野外現(xiàn)場(chǎng)取材。但戊2醛在稀釋溶液中會(huì)自行發(fā)生一系列反應(yīng)，因而固定液應(yīng)盡可能新鮮配制中。