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稀釋法測定小抑菌濃度（MIC）是一種評估抗菌劑抑制微生物生長能力的實驗技術，主要包括微量稀釋法和常量肉湯稀釋法兩種方法。瓊脂稀釋法具有操作簡便、成本低廉、適合高通量篩選等優勢，尤其適合自動化操作和精確控制藥物濃度。肉湯稀釋法直觀、易于操作，適合實驗室規模的測試，并且可以根據實驗需求調整藥物濃度和培養基體積。

瓊脂稀釋法

1、原理

本試驗采用瓊脂稀釋法將不同濃度的抑菌劑混合溶解在瓊脂培養基中，然后點種細菌，通過細菌的生長與否，確定抗（抑）菌物質抑制受試菌生長的低濃度，即小抑菌濃度(MinimalInhibitoryConcentration，MIC)。本方法適用于不溶性抗（抑）菌產品。

2、操作步驟

（1）抗（抑）菌溶液的配制：以無菌操作取5ml或5g（固體研磨后）樣品，放入45ml滅菌磷酸緩沖液中，充分震蕩溶解，配成10%的均勻分散的溶液或懸液。

（2）含抗菌劑培養基配制：將已配成10%的抗（抑）菌溶液或懸液用PBS做對倍系列稀釋成不同濃度的受試液，置45℃～50℃水浴恒溫備用。

（3）雙倍濃度培養基配制：稱取76gMH瓊脂培養基，溶于1000ml水中。加熱至沸騰溶解。然后121℃壓力蒸汽滅菌15min，置45℃～50℃水浴備用。此培養基將用于稀釋抗（抑）菌溶液或懸液。

（4）含抗（抑）菌液培養基的配制：分別取10ml系列稀釋的抗菌液加入平皿內。將在45℃～50℃水浴中的雙倍MH瓊脂培養基10ml，加入平皿內，邊加邊搖晃平板，使抗（抑）菌液和培養基充分混勻，待凝固后備用。

（5）用加樣器取1μl～2μl（含菌量約為107cfu/ml）菌懸液點種于含抗（抑）菌液培養基的平皿，接種后所形成的菌液圈直徑約5mm～8mm（每個點菌量約為104cfu）。

（6）以同樣方法接種不含抗（抑）菌成分的MH瓊脂平板，作為陽性對照。

（7）將接種后的平板放置35℃培養箱中，倒置培養18h～24h，觀察結果。

3、評判規定

菌落生長被完全抑制的低抗（抑）菌液濃度為該樣品對受試菌的MIC。單一菌落生長可忽略不計。

營養肉湯稀釋法

1、原理

本試驗將不同濃度的抑菌劑混合溶解于營養肉湯培養基中，然后接種細菌，通過細菌的生長與否，確定抗（抑）菌劑抑制受試菌生長的低濃度，即小抑菌濃度(MinimalInhibitoryConcentration，MIC)。本方法式用于可溶性抑菌產品。

2、操作步驟

（1）按2.1.1.2所示方法制備的金黃se葡萄球菌、大腸桿菌懸液

（2）含抗菌劑培養基配制：將抗（抑）菌溶液用蒸餾水做對倍系列稀釋成不同濃度的受試液，取各稀釋度受試液2.5ml加入到含2.5ml雙倍濃度營養肉湯的試管中。

（3）取0.1ml含菌量約為108cfu/ml菌懸液接種于含抗（抑）菌劑的營養肉湯的試管中，作為試驗組樣本。

（4）以同樣方法接種不含抗（抑）菌劑的營養肉湯的試管中，作為陽性對照組樣本。

（5）取2支含營養肉湯的試管中，作為陰性對照組樣本。

（6）將試驗組樣本、陽性對照組樣本及陰性對照組樣本放置37℃培養箱中，培養48h，觀察結果。

（7）試驗中應將試驗用菌懸液進行活菌培養計數，其作用濃度應為5×105cfu/ml～5×106cfu/ml。

3、評判規定

當陽性對照管有細菌生長(混濁)，陰性對照管無菌生長(透明)，試驗用菌懸液的作用濃度為5×105cfu/ml～5×106cfu/ml時，試驗組無菌生長的高稀釋度所對應的抗（抑）菌劑濃度，為該樣品對受試菌的MIC。