質(zhì)粒提取實驗常見問題分析
閱讀次數(shù)：548 發(fā)布時間：2024/3/8 10:21:02
質(zhì)粒提取原理
現(xiàn)在較常用的質(zhì)粒提取方法有三種:堿裂解法、煮沸法和去污劑裂解法，兩種方法較為劇烈，適用于較小的質(zhì)粒（＜15Kb），而去污劑裂解法則比較溫合，一般用于分子量較大的質(zhì)粒（＞15Kb）。
堿裂解法是一種廣泛使用的制備質(zhì)粒DNA的方法。其原理為：染色體DNA遠遠大于質(zhì)粒DNA，染色體DNA為線狀分子，而質(zhì)粒為共價閉合環(huán)狀分子。當(dāng)pH 12.0-12.6堿性環(huán)境中，線性的大分子的染色體DNA完/全變性，而共價閉環(huán)質(zhì)粒DNA在將PH調(diào)至中性后即可以恢復(fù)其天然構(gòu)象，在高鹽濃度存在的條件下，染色體DNA和蛋白質(zhì)在去污劑SDS的作用下形成沉淀，而質(zhì)粒DNA仍為可溶狀態(tài)，通過離心可除去大部分細(xì)胞碎片、染色體DNA、RNA及蛋白質(zhì)，質(zhì)粒DNA仍在上清中。
質(zhì)粒提取常見問題分析
1、影響質(zhì)粒提取的因素有哪些？
質(zhì)粒提取的得率和質(zhì)量與很多因素有關(guān)，如宿主菌的種類和培養(yǎng)條件、細(xì)菌細(xì)胞的裂解、質(zhì)粒拷貝數(shù)、質(zhì)粒的穩(wěn)定性、抗生素、吸附膜的吸附能力、提取操作的熟練程度等等。
2、為什么從革蘭氏陽性菌中提取質(zhì)粒要在懸浮液中加入溶菌酶？
革蘭氏陽性菌有一層細(xì)胞壁，必須加入溶菌酶才能使之溶解。
3、如何根據(jù)實驗需要選擇不同別的產(chǎn)品？
從純度上：各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR、測序、文庫篩選、連接和轉(zhuǎn)化，普通純度的質(zhì)粒可以滿足要求；而對于轉(zhuǎn)染實驗，則要求使用高純度質(zhì)粒提取試劑盒方能滿足要求。
從提取的量上：1-20μg，應(yīng)選擇小量提取試劑盒；20-40μg，應(yīng)選擇中量提取試劑盒；大于40μg，應(yīng)選擇大量提取試劑盒。
從宿主菌上：分為普通細(xì)菌質(zhì)粒提取試劑盒、G+菌質(zhì)粒提取試劑盒和酵母菌質(zhì)粒提取試劑盒，根據(jù)情況進行選擇。
客服一
