細(xì)菌是一類原核細(xì)胞型微生物。因菌體小半透明，要想更清楚地觀察其大小和形態(tài)，需經(jīng)染色和顯微鏡放大后才能看到。常用的細(xì)菌染色法有單染法和復(fù)染法。復(fù)染法是用兩種以上的染料染色，可將細(xì)菌染成不同顏色，除可觀察細(xì)菌的形態(tài)外還能鑒別細(xì)菌。主要有革蘭染色法、抗酸染色法、特殊染色法。為了克服傳統(tǒng)染色方法存在的不足，將革蘭染色法、抗酸染色法、莢膜染色法、芽胞染色法等進(jìn)行改良，一起來看看吧。
1.1 革蘭染色法 （1）取含金黃se葡萄球菌和大腸埃希菌的混合菌液涂片、干燥、固定;（2）染色:用結(jié)晶紫染液染1min，水沖洗;盧戈碘液染1min，水沖洗;0.4%復(fù)紅酒精溶液染30s，水沖洗;（3）吸干后鏡檢。
1.2 抗酸染色法 （1）取結(jié)核桿菌陽性的痰標(biāo)本（已處理）涂片、干燥、固定。（2）染色:將石/炭酸復(fù)紅染液沸水浴10min，滴加2～3滴覆蓋菌膜染色 5min，水沖洗，3%鹽酸酒精脫色30s，水沖洗;堿性美蘭復(fù)染30s，水沖洗。（3）吸干后鏡檢。
1.3 莢膜染色法 （1）取接種肺炎球菌死亡的小鼠腹腔液涂片、干燥、固定;（2）染色:用石/炭酸復(fù)紅染液染1min，水沖洗;95%酒精脫色5s水沖洗;20%鞣酸溶液媒染10min水沖洗;0.8%孔雀綠溶液染色1min，水沖洗;（3）吸干后鏡檢。
1.4 芽胞染色法 （1）取等量破傷風(fēng)桿菌厭氧培養(yǎng)菌液和5%孔雀綠水溶液，放入小試管中充分混合，沸水浴20min;取上述混合液涂片、干燥、固定;（2）用 1%沙黃液復(fù)染10min，水沖洗;（3）干后鏡檢。
2.1 革蘭染色 鏡下，金黃se葡萄球菌染成紫色、球形，為革蘭陽性菌;大腸埃希菌染成紅色、桿狀，為革蘭陰性菌。革蘭染色法是細(xì)菌學(xué)中經(jīng)典，應(yīng)用廣泛的染色法。脫色是影響革蘭染色的關(guān)鍵步驟，脫色時間長短直接關(guān)系到染色結(jié)果的準(zhǔn)確性。脫色過度則革蘭陽性菌可能被誤染為革蘭陰性菌，脫色不 夠則革蘭陰性菌可能被誤染為革蘭陽性菌，為此學(xué)生難以把握。現(xiàn)將原有四步染色法改為三步法，即把第三步酒精脫色和第四步復(fù)紅復(fù)染合并一步進(jìn)行，使用 0.4%復(fù)紅酒精溶液作為復(fù)染劑，可達(dá)到脫色和復(fù)染雙重目的。這樣，就可以避免學(xué)生在四步法中因脫色時間不易掌握而造成染色的失敗，減少重復(fù)性實驗，提高了教學(xué)效果。
2.2 抗酸染色 鏡下，結(jié)核分枝桿菌染成紅色，為抗酸菌;背景和其他菌被染成藍(lán)色，為非抗酸菌。傳統(tǒng)的方法是滴加石/炭酸復(fù)紅染液于涂片上，用玻片夾夾住涂片以微火煙葉熱，保持染液冒蒸汽約5min，此法學(xué)生容易使染液蒸干或使染液沸騰，從而影響染色效果和污染環(huán)境。改良后的方法是將染液直接加熱改為水浴后使用，克服上述的缺點，且染色效果良好。適合實驗教學(xué)使用。
2.3 莢膜染色 鏡下，肺炎球菌菌體染成紅色（成雙排列），莢膜染成綠色，存在于菌體的周圍。傳統(tǒng)的莢膜染色是用結(jié)晶紫染液染色，菌體染成紫色，莢膜染成淡紫色或無色，菌體和莢膜之間反差小，不易分辨。改良后，增加了脫色、媒染、復(fù)染的步驟，使菌體和莢膜之間反差增大，易于觀察，可用于學(xué)生實驗和示教片的制作。
2.4 芽胞染色 鏡下，破傷風(fēng)桿菌的菌體染成紅色，芽胞染成綠色。傳統(tǒng)的方法是滴加石/炭酸復(fù)紅染液于涂片上并弱火加熱，使染液冒蒸汽約5min，此法染液用量大，且容易污染衣物和實驗臺。現(xiàn)改為菌液和染液混合水浴加熱初染，然后制備涂片、固定、復(fù)染，即節(jié)約時間，染液消耗又少，且菌體、芽胞對比鮮明。此法適用于教學(xué)標(biāo)本片的制作。
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