一、目的要求
1．證明實驗室環(huán)境與體表存在微生物。
2．比較來自不同場所與不同條件下細(xì)菌的數(shù)量和類型。
3．體會無菌操作的重要性。
二、基本原理
平板培養(yǎng)基含有細(xì)菌生長所需要的營養(yǎng)成分，當(dāng)取自不同來源的樣品接種于培養(yǎng)基上，在37℃溫度下培養(yǎng)，1-2天內(nèi)每一菌體即能通過很多次細(xì)胞分裂而進(jìn)行繁殖，形成一個可見的細(xì)胞群體的集落，稱為菌落。每一種細(xì)菌所形成的菌落都有它自己的特點，例如菌落的大小，表面干燥或濕潤、隆起或扁平、粗糙或光滑，邊緣整齊或不整齊，菌落透明或半透明或不透明，顏色以及質(zhì)地疏松或緊密等。因此，可通過平板培養(yǎng)來檢查環(huán)境中細(xì)菌的數(shù)量和類型。
三、器材
肉膏
蛋白胨瓊脂平板，無菌水，滅菌棉簽（裝在試管內(nèi)），接種環(huán)，試管架，酒精燈或煤氣燈，記號筆（或蠟筆），廢物缸。
四、操作步驟
每組在“實驗室”和“人體”兩大部分中各選擇一個內(nèi)容做實驗，或由教師指定分配，后結(jié)果供全班討論。
1．寫標(biāo)簽
任何一個實驗，在動手操作均需先將器皿用記號筆做上記號，培養(yǎng)皿的記號一般寫在皿底上。如果寫在皿蓋上，同時觀察兩個以上培養(yǎng)皿的結(jié)果，打開皿蓋時，容易混淆。用記號筆寫上班、姓名、日期，本次實驗還要寫上樣品來源（如實驗室空氣或無菌室空氣或頭發(fā)等），字盡量小些，寫在皿底的一邊，不要寫在當(dāng)中，以免影響觀察結(jié)果。
2．實驗室細(xì)菌檢查（1）空氣 將一個肉膏蛋白胨瓊脂平板放在當(dāng)時做實驗的實驗室，移去皿蓋，使瓊脂培養(yǎng)基表面暴露在空氣中；將另一肉膏蛋白胨瓊脂平板放在無菌室或無人走動的其他實驗室，移去皿蓋。一小時后蓋上兩個皿蓋。
（2）實驗臺和門的旋鈕
（a）用記號筆在皿底外面中央畫一直線，再在此線中間處畫一垂直線。
（b）取棉簽 左手拿含有棉簽的試管，在火焰旁用右手的手掌邊緣和小指、無名指夾持棉塞（或試管帽），將其取出，將管口很快地通過煤氣燈（或酒精燈）的火焰，燒灼管口；輕輕地傾斜試管，用右手的拇指和食指將棉簽小心地取出。放回棉塞（或試管帽），并將空試管放在試管架上。
（c）弄濕棉簽 左手取滅菌水試管，如上法拔出棉塞（或試管帽）并燒灼管口，將棉簽插入水中，再提出水面，在管壁上擠壓一下以除去過多的水分，小心將棉簽取出，燒灼管口，放回棉塞（或試管帽），并將滅菌水試管放在試管架上。
（d）取樣 將濕棉簽在實驗臺面或門旋鈕上擦拭約2平方厘米的范圍。
（e）接種 A在火焰旁用左手拇指和食指或中指使平皿開啟成一縫。再將棉簽伸入，在瓊脂表面頂端接種（滾動一下），立即閉合皿蓋。E和F，將原放棉簽的空試管拔出棉塞（或試管帽），燒灼管口，插入用過的棉簽，將試管放回試管架。
（f）劃線 另取接種環(huán)在火焰上滅菌，先將環(huán)端燒熱，然后將接種環(huán)提起垂直放在火焰上，以使火焰接觸金屬絲的范圍廣一些，待接種環(huán)燒紅，再將接種環(huán)斜放，沿環(huán)向上，燒至可能碰到培養(yǎng)皿的部分，再移向環(huán)端，如此很快地來回通過火焰數(shù)次。
左手拿起平板，同樣開啟一縫，將滅過菌并冷卻了的接種環(huán)（可在瓊脂表面邊緣空白處試溫度，若發(fā)出濺潑聲，表示太燙），通過瓊脂頂端的接種區(qū)，向下劃線，直到平板的一半處。注意：接種環(huán)與瓊脂表面的角度要小，移動的壓力不能太大，否則會刺破瓊脂。
閉合皿蓋，左手將平板向左轉(zhuǎn)動至空白處，右手拿的接種環(huán)再在火焰上燒灼，使冷。接種環(huán)通過面劃的線條再在瓊脂的另一半，D上向下來回劃線至1／2處。
燒灼接種環(huán)，轉(zhuǎn)動平板，E，劃后1／4，立刻蓋上皿蓋，燒灼接種環(huán)，放回原處。
整個劃線操作均要求無菌操作，即靠近火焰，而且動作要快。
3．人體細(xì)菌的檢查
（1）手指（洗手與洗手后）
（a）分別在兩個瓊脂平板上標(biāo)明洗手與洗手后（當(dāng)然，班、姓名、日期各項在每次寫標(biāo)簽時是必不可少的）。
（b）移去皿蓋，將未洗過的手指在瓊脂平板的表面，輕輕地來回劃線，蓋上皿蓋。
（c）用肥皂和刷子，用力刷手，在流水中沖洗干凈，干燥后，在另一瓊脂平板表面來回移動，蓋上皿蓋。
（2）頭發(fā) 在揭開皿蓋的瓊脂平板的上方，用手將頭發(fā)用力搖動數(shù)次，使細(xì)菌降落到瓊脂平板表面，然后蓋上皿蓋。
（3）咳嗽 將去蓋瓊脂平板放在離口約6-8cm處，對著瓊脂表面用力咳嗽，然后蓋上皿蓋。
（4）鼻腔
（a）按照實驗臺檢查法的步驟（b）和（c），取出棉簽，并將其弄濕。
（b）用濕棉簽在鼻腔內(nèi)滾動數(shù)次。
（c）按實驗臺檢查法的步驟（e）和（f），接種與劃線，然后蓋上皿蓋。
4．將所有的瓊脂平板翻轉(zhuǎn)，使皿底在上，放37℃培養(yǎng)箱，培養(yǎng)1-2天。
5．結(jié)果記錄方法
（1）菌落計數(shù)在劃線的平板上，如果菌落很多而重疊，則數(shù)平板后1/4面積內(nèi)的菌落數(shù)。不是劃線的平板，也一分為四，數(shù)1/4面積的菌落數(shù)。
（2）根據(jù)菌落大小、形狀、高度、干濕等特征觀察不同的菌落類型。但要注意，如果細(xì)菌數(shù)量太多，會使很多菌落生長在一起，或者限制了菌落生長而變得很小，因而外觀不典型，故觀察菌落的特點時，要選擇分離得很開的單個菌落。
菌落特征描寫方法如下：（a）大小 大、中、小、針尖狀。可先將整個平板上的菌落粗略觀察一下，再決定大、中、小的標(biāo)準(zhǔn)，或由教師指出一個大小范圍。
（b）顏色 黃色、金黃色、灰色、乳白色、紅色、粉紅色等。
（c）干濕情況 干燥、濕潤、粘稠。
（d）形態(tài) 圓形、不規(guī)則等。
（e）高度扁平、隆起、凹下。
（f）透明程度 透明、半透明、不透明。
（g）邊緣 整齊、不整齊。
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