重組
蛋白的產(chǎn)生是應(yīng)用了重組DNA或重組RNA的技術(shù)從而獲得的蛋白質(zhì)。體外重組蛋白的生產(chǎn)主要包括四大系統(tǒng):原核蛋白表達(dá)，哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)，酵母蛋白表達(dá)及
昆蟲細(xì)胞蛋白表達(dá)。
重組蛋白獲得途徑：重組蛋白需要使用表達(dá)系統(tǒng)來對其進(jìn)行制備，其獲得途徑可以分為體外方法和體內(nèi)方法。兩種方法的提都是應(yīng)用基因重組技術(shù)，獲得連接有可以翻譯成目的蛋白的基因片段的重組載體，之后將其轉(zhuǎn)入可以表達(dá)目的蛋白的宿主細(xì)胞從而表達(dá)特定的重組蛋白分子。
體外重組蛋白的生產(chǎn)主要包括四大系統(tǒng)：原核蛋白表達(dá)（常用的大腸桿菌蛋白表達(dá)），哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)（常用的細(xì)胞CHO，HEK293），真核表達(dá)系統(tǒng)（酵母）及昆蟲細(xì)胞蛋白表達(dá)。合適表達(dá)系統(tǒng)的選擇取決于重組蛋白的特性、重組蛋白的預(yù)期應(yīng)用以及該系統(tǒng)能否生產(chǎn)足夠量的蛋白質(zhì)，根據(jù)自身的下游運(yùn)用選擇合適的蛋白表達(dá)系統(tǒng)，提高表達(dá)成功率。
重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)：（1）目應(yīng)用廣泛的表達(dá)系統(tǒng)有三大類，大腸桿菌(Esherichia coli)表達(dá)系統(tǒng)、酵母表達(dá)系統(tǒng)、CHO細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)。其中，大腸桿菌是表達(dá)重組蛋白常用的宿主菌，已應(yīng)用于許多具有重要藥用價(jià)值蛋白的生產(chǎn)。
大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)具有許多優(yōu)點(diǎn)，如生長快、培養(yǎng)成本低廉、遺傳背景清楚和易實(shí)現(xiàn)高密度培養(yǎng)等。大腸桿菌DH5α是一種誘變菌株，主要表現(xiàn)對外源DNA的免疫缺乏。大腸桿菌DH5α是基因工程常用的宿主菌，相比于正常菌種缺少了一定的免疫機(jī)制。
（2）不同的表達(dá)系統(tǒng)和培養(yǎng)方法顯著影響下游的處理過程，目標(biāo)蛋白表達(dá)是否形成包涵體，目標(biāo)蛋白表達(dá)的定位（胞內(nèi)、細(xì)胞膜內(nèi)、周質(zhì)空間和胞外），蛋白表達(dá)的量都依賴于所選擇的的表達(dá)系統(tǒng)。
重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)
重組蛋白種類：目比較熱門的重組蛋白主要為細(xì)胞因子類，而細(xì)胞因子主要包括如下：
按功能分，可分為以下幾種：
1、白細(xì)胞介素（Interleukin，IL）
由多種細(xì)胞產(chǎn)生并作用于多種細(xì)胞的一類細(xì)胞因子。由于初是由白細(xì)胞產(chǎn)生且又在白細(xì)胞間發(fā)揮作用，所以得名，現(xiàn)仍沿用此名。
2、干擾素（interferon，IFN）
具有干擾病毒復(fù)制的能力，故得名。其具有十分廣泛的生物活性，在免疫應(yīng)答和免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用，也是主要的促炎細(xì)胞因子。干擾素分為：I型（7種，如IFN-α和IFN-β）和II型（僅有IFN-Y）。
3、腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）
由于在體內(nèi)外均可直接殺傷腫瘤細(xì)胞而得名。其家族成員約有30個(gè)。
主要成員：
（1）TNF-α，一種單核因子主要由單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生；
（2）TNF-β，一種淋巴因子，主要由淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞等產(chǎn)生，其生物學(xué)活性與TNF-α相類似。
4、集落刺激因子（colony stimulating factor，CSF）
一組在體內(nèi)外均可選擇性刺激造血祖細(xì)胞增殖、分化并形成某一譜系細(xì)胞集落的細(xì)胞因子，包括巨噬細(xì)胞CSF、粒細(xì)胞CSF、巨噬細(xì)胞/粒細(xì)胞CSF、干細(xì)胞因子等。
5、生長因子（growth factor，GF）
一類可介導(dǎo)不同類型細(xì)胞生長和分化的細(xì)胞因子，根據(jù)其功能和所作用細(xì)胞的不同，分別命名為轉(zhuǎn)化生長因子（TGF）、神經(jīng)生長因子（NGF）、表皮生長因子（EGF）、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（VEGF）、成纖維細(xì)胞生長因子（FGF）等。
6、趨化性細(xì)胞因子（chemokine）
一類對不同靶細(xì)胞具有趨化效應(yīng)的細(xì)胞因子家族，可由白細(xì)胞和某些組織細(xì)胞分泌，是一個(gè)包括60多個(gè)成員的蛋白質(zhì)家族。大部分成員含4個(gè)保守的半胱氨酸（cysteine，C）根據(jù)其N端半胱氨酸的排列方式，可分為CXC、CC、C、CX3C四個(gè)亞族。
客服一
