、自噬體介紹
自噬（Auhagy），或稱自體吞噬，是個涉及到細胞自身結構通過溶酶體機制而被分解的過程，該過程是個受到緊密調控的步驟，幫助細胞產物在合成、降解以及接下來的循環中保持個平衡狀態。細胞接受自噬誘導信號后，在胞漿的某處形成個扁平的類似“脂質體”樣的膜結構，稱為Phagophore。隨著Phagophore不斷延伸，將胞漿中的細胞器等成分，全部包裹住成為密閉的結構，稱為“自噬體（auhagosome）”。自噬體形成后，可與溶酶體融合，自噬體中的內容物隨即被降解，產物（氨基酸、脂肪酸等）被輸送到胞漿中，供細胞重新利用，而殘渣或被排出細胞外或滯留在胞漿中。自噬信號通路：
二、自噬研究策略和方法
正常細胞基礎水平自噬活性比較低，對自噬研究通常需要進行人工調節和干預，常用藥物有：
1、自噬誘導劑
a) Bredeldin A / Thapsigargin / Tunicamycin ：模擬內質網應激；
b) Carbamazepine/ L-690，330/ Lithium Chloride（氯化鋰）：IMPase 抑制劑（即Inositol monophosphatase，肌醇單磷酸酶）；
c) Earle＇s平衡鹽溶液：制造饑餓；
d) N-Acetyl-D-sphingosine（C2-ceramide）：Class I PI3K Pathway抑制劑；
e) Rapamycin：mTOR抑制劑；
f) Xestospongin B/C：IP3R阻滯劑。
2、自噬抑制劑
a) 自噬抑制劑3-Methyladenine（3-MA）：(Class III PI3K) hVps34 抑制劑；
b) Bafilomycin A1：質子泵抑制劑；
c) 溶酶體抑制劑Hydroxychloroquine（羥氯喹）。
3、自噬檢測
1) 透射電鏡；
電鏡作為自噬檢測的金指標。由于自噬體屬于亞細胞結構，普通光鏡下觀察不到自噬體的形成，因此，直接觀察自噬體需在透射電鏡下。Phagophore的特征為：新月狀或杯狀，雙層或多層膜，有包繞胞漿成分的趨勢。自噬體（AV1）的特征為：雙層或多層膜的液泡狀結構，內含胞漿成分，如線粒體、內質網、核糖體等。自噬溶酶體（AV2）的特征為：單層膜，胞漿成分已降解。
2) WB檢測標志物LC3/Atg8、p62/SQSTM1、Lamps、Atg5、Atg14和Beclin-1；
a）利用Western Blot檢測LC3-II/I比值的變化以評價自噬形成。自噬形成時，胞漿型LC3（即LC3-I）會酶解掉小段多肽，轉變為（自噬體）膜型（即LC3-II），因此，LC3-II/I比值的大小可估計自噬水平的高低。
b）利用Western Blot檢測p62
蛋白來評價自噬以及自噬流的強弱：p62蛋白水平的多少與自噬流的強弱有著反比例關系。
3) 組織蛋白酶Cathepsin活力檢測；
4) IF檢測自噬潮auhagic flux。
三、自噬研究常規思路
通常情況下，除了研究自噬現象本身，大家更多的是將自噬與各種生命活動或者疾病結合起來，把自噬作為這些方向的個機制來研究。比如研究自噬如何參與腫瘤的發生發展、如何參與腫瘤的耐藥性與復發轉移、如何參與腫瘤免疫治療的效果、如何參與炎癥反應、如何參與氧化應激，如何參與自閉癥、阿爾茲海默癥的發生與治療等，通常的研究模式：
1）證明自噬參與了相關研究表型（電鏡、LC3II/I-WB、LC3亞細胞定位、LC3熒光示蹤監測自噬流等）
2）證明自噬在表型中起到關鍵作用（通過自噬抑制劑、激動劑進行關聯研究）
3）找到表型與自噬橋梁分子（檢測pI3K通路、Beclin-1、ATG家族各成員）
4）在基因層面通過gain of/lost of function研究橋梁分子在自噬中的作用。
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四、自噬相關研究域
1）自噬起始和終止的分子機制
2）細胞自噬與腫瘤
3）細胞自噬與免疫
4）自噬參與炎癥信號通路的調節
5）細胞自噬與神經退行性疾病
6）激活自噬促進免疫化療和放療
7）表觀遺傳學與細胞自噬的關系
8）藥物治療自噬
客服一
