技術(shù)文獻(xiàn)
分光光度計(jì)的原理就是根據(jù)朗伯-比爾定律，我們簡(jiǎn)單點(diǎn)來(lái)說(shuō)，就是不同濃度的樣品有不同的吸光度，吸光度和樣品濃度成函數(shù)關(guān)系，根據(jù)這種關(guān)系，我們就能夠測(cè)出未知量的濃度。
分光光度計(jì)根據(jù)波長(zhǎng)不同主要是分為三種:紫外分光光度計(jì)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、和近紅外分光光度計(jì)。我們今天主要說(shuō)紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)。
A段（190-340）nm、B段（340-900）nm、C段（900-2600）nm由下圖可知，分光光度計(jì)可分為四個(gè)等級(jí)，我們常用的一般都是Ⅲ或Ⅳ級(jí)。
紫外區(qū)主要是氘燈，氘燈提供的光源在(180～375)nm，關(guān)于氘燈的壽命大概在1000小時(shí)左右，可見(jiàn)區(qū)主要是用的鎢燈，鎢燈提供的光源在(320～2500)nm，鎢燈就是我們小時(shí)候用的電燈泡，壽命的話比氘燈要長(zhǎng)點(diǎn)，具體儀器得具體分析了（1000-2000）h左右。
大家需要注意的是不同的光區(qū)，使用不同的吸收池，紫外區(qū)用的是石英吸收池，可見(jiàn)區(qū)用的是玻璃吸收池。不容易被磨損的，就是石英吸收池。還有一種比較容易的辦法，就是石英吸收池和玻璃吸收池，在紫外區(qū)有不同的吸光度，在250nm波長(zhǎng)時(shí)，如果吸光度＜0.07Abs的就是石英吸收池。
吸光度的范圍：由于分光光度計(jì)原理是根據(jù)朗伯-比爾定律，我們做樣品時(shí)，盡可能的將吸光度控制在1以?xún)?nèi)，具體原因有興趣的可以去計(jì)算。
A=lg(1/T)=Kbc
A為吸光度,T為透射比(透光度),是出射光強(qiáng)度（I）比入射光強(qiáng)度(I0).
K為摩爾吸光系數(shù).它與吸收物質(zhì)的性質(zhì)及入射光的波長(zhǎng)λ有關(guān).
c為吸光物質(zhì)的濃度,單位為mol/L，b為吸收層厚度，單位為cm
關(guān)于分光光度計(jì)預(yù)熱時(shí)間，一般要求在20min左右。這個(gè)也很好理解，就是小時(shí)候那種家用燈泡，剛開(kāi)啟時(shí)沒(méi)有那么亮，等段時(shí)間后會(huì)慢慢變亮。穩(wěn)定后，我們做樣品才能穩(wěn)定可靠。
透射比和吸光度的換算：分光光度計(jì)上就這兩個(gè)測(cè)量量，透射比和吸光度什么關(guān)系呢？吸光度=-log(透射比)。
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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