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技術文獻

【細胞融合技術】以人鼠細胞雜交為例說明
閱讀次數:785 發布時間:2025/3/21 10:25:12
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  人、鼠細胞融合實驗分三步進行∶

  先用熒光染料標記抗體∶

  將小鼠的抗體與發綠色熒光的熒光素(fluorescin)結合,人的抗體與發紅色熒光的羅丹明(rhodamine)結合;

  第二步是將小鼠細胞和人細胞在滅活的仙臺病毒的誘導下進行融合;

  后一步將標記的抗體加入到融合的人、鼠細胞中,讓這些標記抗體同融合細胞膜上相應的抗原結合。

  開始,融合的細胞一半是紅色,一半是綠色。在37℃下40分鐘后,兩種顏色的熒光在融合的雜種細胞表面呈均勻分布,這說明抗原蛋白在膜平面內經擴散運動而重新分布。這種過程不需要ATP。如果將對照實驗的融合細胞置于低溫(1℃)下培育,則抗原蛋白基本停止運動。這一實驗結果令人信服地證明了膜整合蛋白的側向擴散運動。

  細胞融合關鍵

  1.技術上的誤差常常導致融合的失敗。例如,供者淋巴細胞沒有查到免疫應答。這必然要失敗的。

  2.融合試驗大的失敗原因是污染,融合成功的關鍵是提供一個無毒無菌的操作環境。


  人、鼠細胞融合實驗分三步進行∶

  先用熒光染料標記抗體∶

  將小鼠的抗體與發綠色熒光的熒光素(fluorescin)結合,人的抗體與發紅色熒光的羅丹明(rhodamine)結合;

  第二步是將小鼠細胞和人細胞在滅活的仙臺病毒的誘導下進行融合;

  后一步將標記的抗體加入到融合的人、鼠細胞中,讓這些標記抗體同融合細胞膜上相應的抗原結合。

  開始,融合的細胞一半是紅色,一半是綠色。在37℃下40分鐘后,兩種顏色的熒光在融合的雜種細胞表面呈均勻分布,這說明抗原蛋白在膜平面內經擴散運動而重新分布。這種過程不需要ATP。如果將對照實驗的融合細胞置于低溫(1℃)下培育,則抗原蛋白基本停止運動。這一實驗結果令人信服地證明了膜整合蛋白的側向擴散運動。

  細胞融合關鍵

  1.技術上的誤差常常導致融合的失敗。例如,供者淋巴細胞沒有查到免疫應答。這必然要失敗的。

  2.融合試驗大的失敗原因是污染,融合成功的關鍵是提供一個無毒無菌的操作環境。


原創作者:上海遠慕生物科技有限公司

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