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技術文獻

細胞培養基礎知識-冷凍細胞活化
閱讀次數:1741 發布時間:2021/4/7 10:37:08
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1. 冷凍細胞之活化原則為快速解凍,以避免冰晶重新結晶而對細胞造成傷害,導致細胞之死亡。

2. 細胞活化后,約需數日,或繼代至二代,其細胞生長或特性表現才會恢復正常 ( 例如產生單株抗體或是其它蛋白質 ) 。

3. 材料

3.1 37 oC 恒溫水槽

3.2 新鮮培養基

3.3 無菌吸管 / 離心管 / 培養瓶

3.4 液氮或干冰容器

4. 步驟:

4.1 操作人員應戴防護面罩及手套,防止冷凍管可能爆裂之傷害。

4.2 自液氮或干冰容器中取出冷凍管,檢查蓋子是否旋緊,由于熱脹冷縮過程,此時蓋子易松掉。

4.3 將新鮮培養基置于 37 °C 水槽中回溫,回溫后噴以 70 % 酒精并擦拭之,移入無菌操作臺內。

4.4 取出冷凍管,立即放入 37 °C 水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在 1 分鐘內全部融化,以 70 % ethanol 擦拭保存管外部,移入無菌操作臺內。

4.5 取出 0.9 ml 解凍之細胞懸浮液,緩緩加入有培養基之培養容器內 ( 稀釋比例為 1:10 ~ 1:15) ,混合均勻,放入 CO2 培養箱培養。另取 0.1 ml 解凍細胞懸浮液作存活測試。

4.6 解凍后是否立即去除冷凍保護劑 ( 例如 DMSO 或 glycerol) ,依細胞種類而異,般而言,大都不需要立即去除冷凍保護劑。惟若要立即去除,則將解凍之細胞懸浮液加入含有 5-10 ml 培養基之離心管內,離心 1,000 rpm, 5 分鐘,移去上清液,加入新鮮培養基,混合均勻,放入 CO2 培養箱培養。

4.7 若不需立即去除冷凍保存劑,則在解凍培養后隔日更換培養基。

原創作者:上海遠慕生物科技有限公司

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