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技術(shù)文獻(xiàn)

淋巴細(xì)胞分離的常用方法及原理
閱讀次數(shù)：1973 發(fā)布時(shí)間：2021/3/26 9:27:06

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純淋巴細(xì)胞群的采集是利用單核細(xì)胞在37℃和Ca2+存在時(shí)，能主動(dòng)粘附在玻璃、塑料、尼龍毛、棉花纖維或葡聚糖凝膠的特性，從單個(gè)核細(xì)胞懸液中除去單核細(xì)胞，從而獲得純淋巴細(xì)胞群。主要的方法有：①粘附貼壁法;②吸附柱過(guò)濾法;③磁鐵吸引法。

、粘附貼壁法

將已制備的單個(gè)核細(xì)胞懸液傾于玻璃或塑料平皿或扁平小瓶中，移至37℃溫箱靜置1h左右，單核細(xì)胞和粒細(xì)胞均貼于平皿壁上，而未貼壁的非黏附細(xì)胞幾乎為純淋巴細(xì)胞，繼用橡皮刮下貼壁的細(xì)胞即為純單核細(xì)胞群。因B細(xì)胞也有貼壁現(xiàn)象，用本法分離的淋巴細(xì)胞群中B細(xì)胞有所損失。

二、吸附柱過(guò)濾法

將單個(gè)核細(xì)胞懸液注入裝有玻璃纖維或葡聚糖凝膠SephadexG10的柱層中，凡有黏附能力的細(xì)胞絕大部分被吸附而黏滯在柱層中，從柱上洗脫下來(lái)的細(xì)胞主要是淋巴細(xì)胞。此法簡(jiǎn)單易行，對(duì)細(xì)胞少損害。

三、磁鐵吸引法

1.利用單核細(xì)胞具有吞噬的特性，在單個(gè)核細(xì)胞懸液中加直徑為3?m的羰基鐵顆粒，置37℃溫箱內(nèi)短時(shí)旋轉(zhuǎn)搖動(dòng)，待單核細(xì)胞充分吞噬羰基鐵顆粒后，用磁鐵將細(xì)胞吸至管底，上層液中含較純的淋巴細(xì)胞。

2.淋巴細(xì)胞亞群的分離原則：根據(jù)相應(yīng)細(xì)胞的特性和不同的標(biāo)志加以選擇性純化。根據(jù)細(xì)胞的特性和標(biāo)志選擇純化所需細(xì)胞的方法是陽(yáng)性選擇法，而選擇性去除不要的細(xì)胞，僅留下所需的細(xì)胞為陰性選擇。常用的方法包括：①E花環(huán)沉降法;②尼龍毛柱分離法;③親和板結(jié)合分離法;④磁性微球分離法及熒光激活細(xì)胞分離儀分離法。

原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司