技術文獻
瓊脂糖凝膠電泳的原理
瓊脂糖凝膠電泳是以瓊脂糖為介質，對不同大小的DNA 或 RNA 實現分離的一種電泳方法。瓊脂糖是一種多糖，具有親水性，但是不帶電荷。
使得 DNA 在堿性條件下使其帶負電荷（pH8.0 的緩沖液），在電流作用下，以瓊脂糖凝膠為介質，由負向正移動，根據不同的 DNA 分子片段的大小和形狀不同，在電場中泳動的速率也不相同，同時在樣品中加入染料能夠和DNA 分子間形成絡合物，經過紫外照射，可以看到 DNA 的位置，從而達到分離、鑒定的目的。
如何選擇瓊脂糖凝膠的濃度
目的產物大小80BP的片段，你可以用2.0%的瓊脂糖凝膠進行電泳，瓊脂糖以及TAE的量的多少，先與你跑得樣品的個數有關，因為你樣品的個數決定了你膠槽的體積，膠槽的體積決定了你的TAE的量，決定了瓊脂糖的量，比如說你膠槽的體積是20ml, 那么你要配2.0%的膠，就需要20ml的TAE和0.4g的瓊脂糖。
做膠的時候要注意一定要讓瓊脂糖充分溶解，可以煮沸，同時也要注意煮沸的過程中TAE的蒸發，第1次做膠的時候，用燒瓶煮沸差點都蒸發光了；再就是加EB的時候以不燙手為標準，因為高于70度時EB會升華蒸發，過于冷卻了會使EB的濃度不均；因為EB為致癌物質，所以操作時一定要注意做好自我保護；再就是膠槽要洗干凈，梳齒一定要放正，免得跑出來的帶不整齊。
跑膠的時間和電壓成反比，電壓和電泳槽兩個電之間的距離成正比，一般是小于5V/cm. 因為你的片段很小，所以很有可能和引物二聚體無法區分，所以你再跑電泳時時間應該適當延長一些，可以使溴芬蘭指示條帶跑過膠的2/3處，因為時間長了，因物二聚體就會跑沒了，而目的產物不會。
瓊脂糖凝膠電泳注意事項
底板一定要用膠帶封緊，否則灌膠時凝膠會漏出。可以在灌膠時先倒少量凝膠在交界處，利用凝固的凝膠將其封緊。
梳子一定不能插到底部，應距離底部1-2mm，否則拔梳子時容易弄破凝膠，導致漏膠，加熱時應注意不要讓瓊脂糖沸騰得太厲害，稍稍沸騰至溶液清涼，即其全部溶解即可，過度沸騰會導致凝膠實際濃度的提高。
將凝膠放入電泳槽時要注意性，不要正負顛倒。要注意撕去兩端的封帶，凝膠的濃度與待分離的DNA的大小有關。一般濃度為1%，低濃度的膠特別易碎，要注意。
原創作者：上海遠慕生物科技有限公司
請輸入要搜索的關鍵詞
上海遠慕生物科技有限公司：細胞凍存液,氨芐青霉素溶液,人白介素ELISA試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒,顯色試劑盒,新生牛血清,標準胎牛血清,牛血清白蛋白溶液,小鼠血漿,雞紅細胞,透明質酸酶溶液,微生物培養基,胰蛋白酶儲存液,兩性霉素B溶液,LB冷凍緩沖液,ABTS試劑,磷酸酶抑制劑,EB緩沖液,熒光染色試劑盒,肥大細胞染色液,人源基因質粒,胡蔓藤堿乙標準品,番茄紅素標準品，Pd-C-II標準品,知母皂苷E標準品,穿刺培養基,puc19質粒,CPD抗凝劑,熒光抗體稀釋液
地址：上海市嘉定區曹安公路5588號 電話：021-58999639 傳真：021-58999639 技術支持：阿儀網 總訪問量：7742775
客服一
