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對于養細胞的人來說，可謂是談 「污」色變，任何時候聽見細胞污染晴空萬里立馬暴風雨，而細胞污染又是養細胞過程中，尤其是新手經常遇到的問題。

細胞污染是一個很廣的范圍，微生物的種類更是各種各樣，不同的污染的原因不同處理也不同，因此掌握對常見細胞污染的識別至關重要。

自己也是從剛開始養細胞 3 天一個小污染 7 天一個大污染過來，也積累了些經驗，自己整理歸納了一下，希望對養細胞的同學有所幫助。

講細胞污染之前需要說明一點，就是對待細胞大家一定要給予極大的重視，因為細胞相關的實驗細胞的狀態是很重要的。

對于確定污染的細胞的辦法就是及時丟棄，積極排查細胞污染的原因，除非是特別重要的細胞才會去搶救，而且搶救污染的細胞本來就有一定的風險，搞不好還可能會污染別的細胞。

下面進入正題，一般細胞污染大概分為細菌污染、真菌污染、支原體污染還有說法不一的黑膠蟲污染等。每種污染的特征都很明顯，因為微生物種類實在太多，所以我就選取比較典型和常見的污染講下。

識別細胞污染的步就是從培養箱拿出細胞后觀察細胞培養液的顏色，以常用的 DMEM 基礎培養液為例，一般使用 DMEM 配制的培養液的顏色為鮮紅色，而且是澄清透亮的，注意透亮不代表沒有顏色。

但是大多數情況下會看到以下幾種顏色，1 號管顏色偏紫一般原因是培養基 ph 升高置 ph 升高因有兩個一個是培養液在冰箱放置太久，培養液中的二氧化碳逸出，第二個是培養箱沒二氧化碳了，而且整個培養箱的細胞都會出現一樣的顏色。

2 號管顏色有點偏紅，一般是細胞生長消耗營養物質導致液 ph 稍微降低。

3 號和 4 號管顏色發黃，導致培養液顏色發黃的原因是培養液中的營養被大量消耗，培養液 ph 降低導致，導致 ph 降低的原因一般是細胞生長太快太滿，提醒自己需要給細胞換液或者傳代，但是有時細胞密度低生長速度緩慢也會出現這種情況，這時候就要懷疑是不是細胞污染了，除了細胞以外有其他東西在消耗著培養液的營養。

5 號管培養液呈肉眼可見的渾濁，這種情況一般就是細菌污染，具體判斷還需要結合鏡下的特征。

第二步就是去導致顯微鏡下結合鏡下特征判斷：

細菌污染

特征：培液會變黃，而且是渾濁的黃色，鏡下觀察不到正常細胞形態，鏡下遍布細沙樣的黑點。細菌污染一定要及時查找原因，如果換液的細胞全部污染，就要懷疑是不是培養液污染，或者使用的器械污染。

如果傳代的細胞全部污染，也要懷疑培養液的問題，但是不要忽略了胰酶的問題。如果個別皿污染，有可能是一不小心蹭到或者槍頭碰到非無菌區域。

懷疑是胰酶或者是培養液的問題，可以空培養，取空皿只加入懷疑的胰酶或者培養液培養，第二天觀察。

霉菌污染

特征：培液不變渾濁但是會變黃，一般肉眼可見培養液中有團塊的霉菌菌落，鏡下呈細絲竹節管狀，有菌絲結構。霉菌梅雨季節多見，一般霉菌污染及時扔掉，徹底清潔培養箱

白色念珠菌污染

特征：培液顏色沒有明顯改變，污染嚴重會變黃，但是是澄清的黃不變渾濁，鏡下觀察到好多像球形的亮點，多的話會聚集成葡萄串樣。白色念珠菌污染不要搶救立馬扔了，救也救不好，而且白色念珠菌會互相通過孢子傳染。

桿菌污染

特征：鏡下看到許多桿狀的細菌，培液顏色沒有明顯改變。

支原體污染

特征：支原體污染很隱蔽，主要表現為細胞在生長速度變慢，細胞狀態形態改變，而且不斷死亡，鏡下沒啥改變，有時可見許多黑色的細胞碎片。檢測支原體污染可以使用支原體檢測試劑盒進行檢測，現在市面上抗支原體的藥很多，效果也都可以。不確定是不是支原體污染可以使用支原體藥試一下，如果細胞狀態明顯改善，有可能就是支原體污染。

黑膠蟲污染

特征：很邪乎，各種說法都有，一般認為是鏡下許多黑點在不斷布朗運動，剛開始對細胞沒啥明顯影響，多時會影響細胞的生長。一般也治不好，就扔了吧。現在主流認為黑膠蟲是血清的問題，可以從新換一批次血清試一下。

其實污染也沒有想象中的那么可怕，在做好消毒滅菌工作的基礎上，提高自己的無菌意識和操作技術才是*為重要的。

從進入細胞培養室的穿著到超凈臺里物品的擺放都大有學問，對于剛養細胞的新手跟著師兄師姐養細胞是個很好的方式，剛開始不要著急上手，看師兄師姐操作時重點看他們的物品擺放、培養皿培養板開蓋的方式和放置、吹打細胞的手法等小細節。

原創作者：上海遠慕生物科技有限公司