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技術文獻

馬丙二醛（MDA）ELISA試劑盒操作說明書
閱讀次數：1896 發布時間：2017/10/9 10:48:43

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馬丙二醛（MDA）elisa試劑盒操作說明書

中文名：馬丙二醛(MDA)ELISA試劑盒
別名：馬丙二醛(MDA)ELISA Kit
供應商：上海遠慕
規格：48t/96t
保存溫度：2-8℃
有效期：6個月
檢測原理：采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。
服務承諾：工作時間內免費技術咨詢和指導，提供來樣檢測及免費代測服務，保證實驗結果的有效性。
研究領域：炎癥研究、神經生物學、腫瘤研究、新陳代謝、信號通路、免疫學、傳染病、其他研究。
適用范圍：科研實驗等領域科學研究，不得用于臨床診斷。
特點：敏感性高、特異性強、重復性好、試劑穩定、易保存，操作簡便。
用途：用于測定血清，血漿及相關液體樣本中相關含量或活性。

馬丙二醛(MDA)ELISA檢測試劑盒性能：
1. 準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值，大于等于0.9900。
2. 靈敏度：檢測濃度小于（參考說明書）
3. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4. 重復性：板內、板間變異系數均小于15%。
5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
6. 有效期：6個月

馬丙二醛(MDA)ELISA檢測試劑盒組成及試劑配制：
1、酶聯板（Assay plate ）：一塊（96孔或者48孔）。
2、標準品（Standard）：2瓶（凍干品）。
3、樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4、生物素標記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液（HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6、生物素標記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7、辣根過氧化物酶標記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8、底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

馬丙二醛（MDA）ELISA試劑盒操作說明書樣品收集、處理方法：
1、血清－－－－-室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心
2、血漿－－－－-應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心
3、細胞培養上清－－-檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清
4、組織標本－－－－-切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用
5、培養細胞－－－－- 檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

馬丙二醛（MDA）ELISA試劑盒操作說明書操作步驟：
實驗開始前，請提前配置好所有試劑，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制)，37℃,60分鐘。
3.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記抗體工作液) 100μl，37℃，60分鐘。
5.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色(30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止)。
7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。
8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后15分鐘以內進行檢測。

馬丙二醛(MDA)ELISA試劑盒注意事項：
1.不同廠家生產的試劑盒因生產工藝和操作方法略有不同，務必按照胰島細胞抗體(ICA)檢測試劑盒(人大小鼠等）說明書嚴格操作，否則容易產生檢測結果的不確定性.
2.若不同批號胰島細胞抗體(ICA)檢測試劑盒(人大小鼠等）的不同組分(A液或酶工作液)，或不同試劑的不同組分進行交叉使用，有可能出現顯色淺或本底高，花板等情形。
3.反應時間的誤差，做大量標本時，孔和*后一孔以及一些特殊標本可能影響較大。
4.臨界值附近標本波動為正常現象，任何試劑均不可避免。可以考慮將標本做奇數次復檢。
5.加樣時樣品量誤差，對于陰或很陽的標本影響不大，但對閾值附近的標本影響極大，建議校對加樣器。

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