技術文獻
馬丙二醛(MDA)ELISA試劑盒操作說明書
閱讀次數:1896 發布時間:2017/10/9 10:48:43
中文名:馬丙二醛(MDA)ELISA試劑盒
別名:馬丙二醛(MDA)ELISA Kit
供應商:上海遠慕
規格:48t/96t
保存溫度:2-8℃
有效期:6個月
檢測原理:采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。
服務承諾:工作時間內免費技術咨詢和指導,提供來樣檢測及免費代測服務,保證實驗結果的有效性。
研究領域:炎癥研究、神經生物學、腫瘤研究、新陳代謝、信號通路、免疫學、傳染病、其他研究。
適用范圍:科研實驗等領域科學研究,不得用于臨床診斷。
特點:敏感性高、特異性強、重復性好、試劑穩定、易保存,操作簡便。
用途:用于測定血清,血漿及相關液體樣本中相關含量或活性。

馬丙二醛(MDA)ELISA檢測試劑盒性能:
1. 準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值,大于等于0.9900。
2. 靈敏度:檢測濃度小于(參考說明書)
3. 特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4. 重復性:板內、板間變異系數均小于15%。
5. 貯藏:2-8℃,避光防潮保存。
6. 有效期:6個月
馬丙二醛(MDA)ELISA檢測試劑盒組成及試劑配制:
1、酶聯板(Assay plate ):一塊(96孔或者48孔)。
2、標準品(Standard):2瓶(凍干品)。
3、樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4、生物素標記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6、生物素標記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7、辣根過氧化物酶標記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
馬丙二醛(MDA)ELISA試劑盒操作說明書樣品收集、處理方法:
1、血清-----室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心
2、血漿-----應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心
3、細胞培養上清---檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清
4、組織標本-----切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用
5、培養細胞----- 檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
馬丙二醛(MDA)ELISA試劑盒操作說明書操作步驟:
實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1. 加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
2.棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制),37℃,60分鐘。
3.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。
5.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。
8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。
馬丙二醛(MDA)ELISA試劑盒注意事項:
1.不同廠家生產的試劑盒因生產工藝和操作方法略有不同,務必按照胰島細胞抗體(ICA)檢測試劑盒(人 大小鼠等)說明書嚴格操作,否則容易產生檢測結果的不確定性.
2.若不同批號胰島細胞抗體(ICA)檢測試劑盒(人 大小鼠等)的不同組分(A液或酶工作液),或不同試劑的不同組分進行交叉使用,有可能出現顯色淺或本底高,花板等情形。
3.反應時間的誤差,做大量標本時,孔和*后一孔以及一些特殊標本可能影響較大。
4.臨界值附近標本波動為正常現象,任何試劑均不可避免。可以考慮將標本做奇數次復檢。
5.加樣時樣品量誤差,對于陰或很陽的標本影響不大,但對閾值附近的標本影響極大,建議校對加樣器。
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馬丙二醛(MDA)ELISA試劑盒操作說明書標簽:
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