人elisa試劑盒如何進行洗滌，它的顯色原理是什么。今天上海遠慕為您一一說明。
洗滌 ：
洗滌是ELISA不同于均相免疫學檢測技術的一大特征，洗滌在整個ELISA反應過程中雖不是一個反應步驟，卻非常關鍵。其目的是去除反應體系中與反應無關的成分，包括未結合的酶結合物以及反應過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質。洗滌液通常為含有一定濃度Tween 20 的緩沖液，Tween 20 是一種非離子去垢劑，既含親水基團，又含疏水基團，在洗滌中的作用機制是借助其疏水基團與經疏水性相互作用被動吸附于聚苯乙烯固相上蛋白分子的疏水基團形成疏水鍵，從而削弱蛋白分子與固相的吸附。同時在其親水基團與液相中水分子的結合作用下，促進蛋白質分子脫離固相而進入液相，*終被洗脫。必須注意非離子去垢劑的使用濃度，*常用的洗滌液是含0.05 %Tween20，pH為中性的磷酸鹽緩沖液，如果洗滌液中的Tween20 超過0.2% ，可使包被于固相上的抗原抗體解吸附而影響實驗的測定下限。洗滌可采用洗板機或手工洗滌兩種方式，手工洗板則分為浸泡式和流水沖洗式洗滌。無論洗板方式如何，在向板內注液時應當避免氣泡殘留孔內，否則會因洗滌液難以進入孔中而影響洗滌效果。在采用洗板機洗板時，要保證洗板機上的每個吸液針都能一致地插入板孔底部將洗液完全吸凈，要求洗板后殘液小于2 μL，即人工扣板墊紙不濕，浸泡時間超過45 秒。
顯色 ：
大多數情況下ELISA商品多選用HRP 和堿性磷酸酶（ALP）。HRP可催化的底物為過氧化氫，參加反應的顯色供氫體有鄰苯二胺（OPD）、鄰聯甲苯胺（OT）及四甲基聯苯胺（TMB）等。其中OPD 難溶于水，見光易變質，使用前配制，反應過程須避光且OPD有一定毒性。TMB 的反應產物為藍色，目視對比鮮明，其性質穩定，對人體無毒。若選用各類酸性終止液，則會使藍色轉變為黃色。TMB作底物時的產物檢測波長為450 nm ，ALP 作為標記物，其底物一般采用對硝基苯磷酸酯（pNPP），產物為黃色的對硝基酚，吸收波長是405 nm。為了保證結果的穩定性，必須要嚴格按照試劑盒說明書中規定的溫度和時間操作，不可隨意改變溫度和時間。
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