固定的目的細胞制片的迅速固定是制片過程中關鍵的一步，否則會影響細胞學診斷的準確性。對于不同的標本需要不同的固定方法。*為常用的固定方法是95％酒精作為固定液的濕固定法。酒精作為一種脫水劑能夠防止細胞內的酶捋蛋白質分解而自容，并凝固細胞內的物質如蛋白質、脂肪和糖類等，使其保持與組織生活相仿的成分，從而使細胞各部分，尤其核染色質易于著色。對于巴氏染色來說，酒精固定*為重要的。如果酒精濃度不足引起的固定不佳，可造成細胞的人為變化，并可導致假陽性或假陰性的診斷。
1、固定方法濕固定法：作為用95％酒精固定液固定的細胞學標本一定使用濕固定法。制片制備完后，趁標本新鮮而又濕潤時，立即放入盛有95％酒精的固定缸內。制片在固定液內至少保持15-30min。固定時間通常不超過1周。這種制片染色后，顏色鮮艷，結構清晰。如果細胞制片需要送至另一實驗室或郵寄他處染色時，可以固定15min后，把制片取出后立即密封的容器中或者使用甘油防止制片干燥。因為無論固定前或固定后的制片，如果發生干燥后都會影響染色的效果。
2、固定注意事項固定液的過濾：為了防止細胞污染，凡是使用過的固定液，必須過濾后才能再使用。使用過長的固定液，必須用酒精相對密度計測定，酒精濃度低于90％時應該及時更換新液。濕固定的重要性：標本再新鮮時及時固定時保證染色效果的重要因素。如蘇木素對細胞核的染色，巴氏染色中胞漿的特殊著色作用，均可因標本干燥后固定而大受影響。制片標本的郵寄：標本再固定15min后取出，立即加甘油數滴于制片上，裝入密封的小盒中。實驗室在收到標本后，先浸入95％酒精中，使甘油溶去，再進行染色。
以上就是巴氏染色液實驗操作中的固定方法。
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