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技術文獻

上海遠慕闡述：ELISA實驗血液樣本收集方法
閱讀次數：1845 發布時間：2016/12/16 11:40:05

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    ELISA實驗血液樣本收集方法：
    全血根據收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
    標本的存放溫度及時間，血清、血漿及細胞分離的方法步驟也是分析前影響檢驗結果的重要因素。抽血后，血細胞因代謝需要，要消耗掉部分營養成分，故對這些成分進行測定時，需及時地離心以分離掉細胞成分。
    采血前個體的準備情況，如空腹時間的長短、采樣時間的確定及采血時患者的姿勢；止血帶應用時間，輸液情況，體育運動，抗凝劑及穩定劑的選用；標本的處理等均可影響到某些檢驗指標的水平。故標本采集過程應標準化，以限度地減少分析前誤差。

    一、不抗凝收集血清：
    1、無添加劑的干燥空管收集:
    血管內壁均勻涂有防止掛壁的藥劑(硅油)。它利用血液自然凝固的原理使血液凝固，等血清自然析出后，離心使用。主要用于血清生化(肝功、腎功、心肌酶、淀粉酶等)、電解質(血清鉀、鈉、氯、鈣、磷等)、甲狀腺功能、藥物檢測、艾滋病檢測、腫瘤標志物、血清免疫學檢測。
    亦可直接用干燥EP管收集全血，充分靜置使得紅細胞充分自然凝固后，離心分離出血清待用或保存。
    2、用促凝管收集:
    采血管內壁均勻涂有防止掛壁的硅油，同時添加了促凝劑。促凝劑能激活纖維蛋白酶，使可溶性纖維蛋白變成不可溶性的纖維蛋白聚體，進而形成穩定的纖維蛋白凝塊，如果想快點出結果時，可采用促凝管。一般靜置半小時到1小時，直接離心分離出血清待用或保存,常用于急診生化。
    3、含有分離膠及促凝劑的采血管收集：
    用促凝管的優點：
    ①、加速紅細胞的凝固，無需長時間的靜置；
    ②、帶有分離膠，有效的將血清分離出來，更好的避免溶血；
    收集血清的缺點：
    ①、需要紅細胞的充分凝固，所需靜置時間較長；
    ②、分離出的血清相對較少，1ml全血不抗凝約只能分離出0.2-0.3ml血清。

    二、抗凝收集血漿：
    收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接離心分離血漿待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及枸櫞酸鈉。
    1、肝素抗凝：
    *常用的抗凝劑，一般情況下對相關指標都不會有干擾，同時抗凝比例較大（抗凝劑：全血=1:30），對血液基本沒有稀釋影響。
    2、EDTA抗凝：
    乙二胺四乙酸是一種氨基多羧基酸，可以有效地鰲合血液中的鈣離子，鰲合鈣會將鈣從
    反應點移走將阻止和終止內源性或外源性凝血過程，從而防止血液凝固，與其他抗凝劑比較而言，其對血球的凝集及血細胞的形態影響較小，故通常使用EDTA鹽(2K、3K、2Na)作為抗凝劑。用于一般血液學檢查，不能用于血凝、微量元素及PCR檢查。
    3、枸櫞酸鹽抗凝:
    檸檬酸鈉通過作用于血樣中鈣離子鰲合而起抗凝作用，國家臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)推薦為3.2％或3.8％，抗凝劑與血比例為1：9，主要用于纖溶系統(凝血酶原時間、凝血酶時間、活化部分凝血酶時間、纖維蛋白原)。采血時應注意采足血量，以保證檢驗結果的準確性，采血后應立即輕輕顛倒混勻5-8次。由于抗凝比例較小（抗凝劑：全血=1:9），對血液有一定的稀釋，一般不建議。

    三、收集血清、血漿所用離心轉速：
    分離血清或血漿，根據種屬不同，離心轉速也有差異,推薦離心轉速為:
    ①、小鼠：一般1000-1500轉/分，離心8-10分鐘；
    ②、大鼠、兔子：一般2000-2500轉/分，離心8-10分鐘；
    ③、人：一般2500-3000轉/分，離心8-10分鐘。

    四、高脂及溶血因素的影響:
    溶血的影響:
    溶血對某些檢驗指標的的影響不僅取決于所采用的方法，也取決于所用的分析儀器。采用雙波長測定法可在一定程度上消除Hb的顏色干擾，然而Hb的干擾并不能完全消除，尤其是當Hb可以與采用的試劑發生作用時。總的來說，輕微的溶血，對大多數臨床化學指標的測定方法無明顯干擾。嚴重的溶血，可能有兩方面的影響：（1）測定成分在紅細胞內的濃度高于血漿時，導致測定結果偏高；（2）測定成分在RBC內濃度低于血漿時，產生輕微的稀釋效應。

    五、全血或紅細胞的收集及保存
    測定全血或者是紅細胞中相關指標的話，首先需要收集抗凝全血。
    全血：收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接定量吸取全血，用冷蒸餾水制備溶血液后用于不同指標的檢測；也可定量吸取全血，轉入EP管，低溫凍存（溫度越低越好），測定之前解凍并按比例加入冷蒸餾水制成溶血液用于檢測。紅細胞：收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，直接離心吸走血漿，留下層紅細胞，加入3倍體積的生理鹽水，輕輕顛倒混勻，500～1000轉/分,離心5分鐘，棄上清留沉淀紅細胞,重復2～3次,至上清液無色為止（洗滌紅細胞）。
    ①、直接定量吸取紅細胞，按比例加入冷蒸餾水制成溶血液待測；
    ②、定量吸取紅細胞，轉入EP管，立即低溫凍存（溫度越低越好），測定之前解凍，并按
    比例加入冷蒸餾水制成溶血液用于檢測(解凍后部分紅細胞會破裂,因此樣本冷凍保存之前必須進行定量)。

原創作者：上海遠慕生物科技有限公司