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技術文獻

遠慕生物：動物細胞培養基本要求
閱讀次數：2040 發布時間：2016/12/12 11:37:55

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——以下由上海遠慕生物提供，僅參考，詳情來電！

動物細胞培養實驗的基本要求

    ①清洗玻璃制品時，浸酸之后一定要用自來水沖洗10～15次。因為殘存的洗液對細胞黏附有很大影響。清洗塑料制品時要用棉花或柔軟紗布擦洗。千萬不要用硬毛刷，否則損害塑料表面后細胞不易貼壁。加樣器頭(Tip)和離心管(Tube)一定要用超聲清洗處理后逐個清洗．如沒有洗凈會影響下一次使用的效果。
    ②干熱滅菌時，應在白天使用烤箱，并不斷觀察，以免發生意外。當溫度超過100℃時，不能玎開烤箱門。器皿烤完后，待溫度降至100℃之下才能開烤箱門。金屬器械、橡膠和塑料制品不能使用干熱滅菌方法。
    ③重高壓滅菌后器皿務必晾干或烘干，以防包裝紙潮濕發霉：
    ④牛血清、大部分培養基、胰酶和一些生物制劑(如TdR，秋水仙素，谷氨酰胺，異硫氰酸胍，MOPS等)是有機溶液，均不能高壓。
    ⑤濾過除菌時，濾器在使用前先裝好濾膜(有時可在上面加一層定性濾紙)，包好，經高壓滅菌后才能使用。濾過酶類制劑時應待濾器溫度降至室溫后再進行。過濾時壓力不宜過大，壓力數字以2為宜。壓力太大時微孔濾膜可能破裂，或使某些微生物變形而通過濾膜。裝濾膜時位置要準確。另外濾器包裝時，螺釘不要擰得太緊，以防高壓蒸汽不能進入，待高壓滅菌之后，再擰緊使用。
    ⑥使用化學消毒法時，配制。75％，酒精應用衛生級，不要用化學純、分析純和優質純酒精。來蘇兒水不能用于皮膚消毒，它對皮膚有刺激性。空氣消毒時，所有的物品要事先準備齊全并使消毒者有較方便的退出途徑。因為甲醛或乳酸加熱后放出的蒸氣對人的角膜和呼吸道上皮有嚴重的刺激和傷害作用。
    1)實驗前準備
    實驗前必須分門別類地制訂操作卡片，如清洗卡、消毒卡、細胞常用液(細胞培養液、BSS液、消化液)配制卡、牛血清檢測分裝卡、細胞原代和傳代操作卡等：各卡片上注明實驗所需器材的名稱、規格、數量、操作要領和實驗注意事項等。實驗前應按卡片收集、清點所需用品，一并放入超凈臺內，這樣可避免操作時因物品不全而往返拿取所造成的污染：同時，根據每個實驗的要求，準備好瓶管支架、器械消毒盒等。實驗器材準備數要大于實驗使用數，瓶蓋數要大于瓶數。這樣才能有條不紊地做實驗，也減少了忙亂操作所引起的污染。
    2)無菌室和操作室消毒
    無菌室內每周用乳酸蒸氣(或過氧乙酸)加紫外線消毒1～2次。實驗前，將實驗器材放入超凈臺內，打開超凈臺紫外線燈，同時啟動超凈臺風機，40min后消毒完畢，關閉紫外線燈。這樣，超凈臺內空氣被凈化，超凈臺面構成相對無菌的環境。
    3)無菌操作要求
    ①手指不能觸及器材使用端。如觸及，器材需更換或燒灼后再使用(如瓶口)。
    ②減少手與器材的接觸面，學會手指操作。
    ③一切操作，如打開或封閉瓶口，安裝吸管、注射器等，都要在火焰前方進行。瓶口、吸管、注射器使用前要經過火焰消毒后使用。
    ④瓶口順風斜放在支架上。試劑用后立即封閉瓶口。瓶口長時間敞開會增加落菌的機會。
    ⑤不同的細胞同時操作時，要專管專用，并要勤換吸管，防止擴大污染和交叉污染。
    ⑥瓶口液滴不能倒回瓶內。液滴用干酒精棉球擦拭，瓶口再經火焰消毒。
    ⑦操作者動作要準確敏捷，盡量避免空氣流動。
    4)實驗中操作要求
    洗手、著裝與外科臨床要求相同。雙手用肥皂洗凈后浸泡于消毒液中，并用75％的酒精擦拭。細胞培養用液從冰箱取出，試劑瓶口和外壁經酒精紗布擦洗后入超凈臺。超凈臺面要用酒精紗布擦拭。超凈臺上的物品面布局合理，污物廢液缸、酒精棉球缸在右側位，酒精燈在中央位，試劑瓶在左側位。拆除大包裝，點燃酒精燈(95％酒精)。火焰無色或微黃色表示酒精雜質少，酒精燃燒完全(不能使用廢酒精或工業酒精，這類酒精燃燒時產生的化學物質易附著到吸管或其他瓶、皿上，帶入培養液中會傷害細胞)。浸泡。75％酒精中的金屬器械用臺面消毒鑷子取出，經無菌干紗布擦拭后，迅速通過火焰(器械不能在火焰中灼燒過長時間)，冷卻后使用，避免燙傷細胞。細胞培養液、牛血清、酶液的吸管，使用后不能再用火焰消毒，因為吸管中殘留的培養液被燒焦碳化，再使用時，會把有害碳化物帶人培養液中毒害細胞。操作中手指被污染時，可用酒精紗布或棉球擦拭。在實驗過程中，不要面向操作臺講話或咳嗽，避免將唾沫中微生物帶入超凈臺內，污染空氣。實驗者離開超凈臺時，立即用肘關節關閉側窗口．避免無菌室內細菌隨空氣流人凈化操作區。
    5)實驗后要求
    實驗完畢，關閉超凈臺風機和電源，未使用過的器材放入飯盒內，用過的玻璃器材投入清水中浸泡，包裝紙疊卷，繩成束分類歸入，*后，超凈臺面用酒精紗布或棉球擦拭，紫外線消毒。
    6)注意事項
    無菌操作離不開火和酒精，操作中避免事故發生。要用打火機點火�；鸩顸c火時，火星德滅后投入廢缸內(缸內有廢酒精棉球)。酒精濺出臺面或瓶外壁時，立即擦干；一旦發生著火事故，立即關閉超凈臺風機，用飯盒、濕布撲滅火焰。