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技術文獻

大鼠P物質（SP）ELISA檢測試劑盒使用說明書
閱讀次數：1904 發布時間：2016/7/29 14:07:39

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大鼠P物質（SP）ELISA檢測試劑盒使用說明書

檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被大鼠P物質（SP）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠P物質（SP）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

上海遠慕生物科技公司高品質elisa試劑盒供應商，品質卓越，價格實惠，售后完善，并提供免費代檢測服務。

樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品
    酶標儀（450nm）
    高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
    37℃恒溫箱

操作注意事項
      試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。
      實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
      標準品稀釋液即可視為陰性對照或者空白；預處理后的樣本無需稀釋，直接取10μL加樣即可。
      嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
      所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

名稱	96孔配置	48孔配置	備注
微孔酶標板	12孔×8條	12孔×4條	無
標準品（160pg/mL）	0.6mL	0.6mL	按說明書進行稀釋
標準品稀釋液	6mL	3mL	無
樣本稀釋液	6mL	3mL	無
檢測抗體-HRP	10mL	5mL	無
20×洗滌緩沖液	25mL	15mL	按說明書進行稀釋
底物A	6mL	3mL	無
底物B	6mL	3mL	無
終止液	6mL	3mL	無
封板膜	2張	2張	無
說明書	1份	1份	無
自封袋	1個	1個	無

洗板方法
      手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
      自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步驟
      從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
      設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
      待測樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；
      隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
      棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
      每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
      每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

結果判斷
繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。

試劑盒性能
1. 準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值，大于等于0.9900。
2. 靈敏度：檢測濃度小于1.0pg/mL。
3. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4. 重復性：板內、板間變異系數均小于15%。
5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
6. 有效期：6個月

原創作者：上海遠慕生物科技有限公司