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技術文獻

慢病毒包裝的作用和關鍵點說明
閱讀次數：1461 發布時間：2023/1/31 10:40:12

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　　慢病毒是逆轉錄病毒的一種，它能夠將靶基因導入到一些較難轉染的細胞，如原代細胞等，并且將靶基因隨機整合到宿主的基因組中，從而大大增加了轉染效率，并且能夠在細胞系中穩定表達若干代，可以進行穩轉細胞株的篩選。因為是隨機整合，也有不確定因素，有些公司還能提供定點整合技術，將靶基因定點整合到基因組特定的部位，從而保/證其高/效表達并且對細胞不產生隨機整合可能產生的傷害。

慢病毒包裝質粒可提供所有的轉錄并包裝shRNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產生高滴度的病毒顆粒，需要利用表達載體和包裝質粒同時共轉染細胞，在細胞中進行病毒的包裝，包裝好的假病毒顆粒分泌到細胞外的培養基中，離心取得上清液后，可以直接用于宿主細胞的感染，目的基因進入到宿主細胞之后，經過反轉錄，整合到基因組，從而高水平的表達效應分子。

慢病毒包裝的幾個關鍵點：

其關鍵點是細胞因素、載體系統（盡量使用成熟的商業化載體系統）、構建重組的質粒正確與否、質粒抽提純化情況、包裝轉染控制（24、48小時的細胞及熒光狀態判斷）、目的基因對病毒包裝影響(基因大小、序列情況、蛋白功能毒性等都會影響到是否能包裝成功）。

純化后的慢病毒保存方法：慢病毒純化后的病毒用無血清的DMEM保存就可以了，一般放在-80度進行長/久保存。如果收集的上清不想立即純化可先放在-80度，等下次收集的一起純化。目的蛋白在包裝細胞中或者滴度測定細胞中會表達的，滴度測定就是根據目的蛋白表達情況來進行操作的。

原創作者：上海遠慕生物科技有限公司