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技術(shù)文獻(xiàn)

大鼠睪酮（T）ELISA試劑盒原理和說(shuō)明書(shū)
閱讀次數(shù)：1899 發(fā)布時(shí)間：2016/1/29 11:26:34

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    大鼠睪酮（T）elisa試劑盒原理和說(shuō)明書(shū)

    大鼠睪酮（T）ELISA試劑盒原理操作注意事項(xiàng)

    1.試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。

    2.實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

    3.濃度為0的S0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白；預(yù)處理后的樣本無(wú)需稀釋?zhuān)苯尤?0μL加樣即可。

    4.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

    5.所有液體組分使用前充分搖勻。

    試劑盒組成

    名稱(chēng)96孔配置48孔配置備注

    微孔酶標(biāo)板12孔×8條12孔×4條無(wú)

    標(biāo)準(zhǔn)品0.3mL*6管0.3mL*6管無(wú)

    生物素1mL0.5mL無(wú)

    檢測(cè)抗體-HRP10mL5mL無(wú)

    20×洗滌緩沖液25mL15mL按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋

    底物A6mL3mL無(wú)

    底物B6mL3mL無(wú)

    終止液6mL3mL無(wú)

    封板膜2張2張無(wú)

    說(shuō)明書(shū)1份1份無(wú)

    自封袋1個(gè)1個(gè)無(wú)

    注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0、20、40、80、160、320pg/mL

    試劑的準(zhǔn)備

    20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1：20稀釋?zhuān)?份的20×洗滌緩

    沖液加19份的蒸餾水。

    洗板方法

    1.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

    2.自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

    大鼠睪酮（T）ELISA試劑盒原理操作步驟

    1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

    2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

    3.待測(cè)樣本孔先加生物素10μL，再加待測(cè)樣本50μL；

    4.隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

    5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

    6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

    7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

    結(jié)果判斷

    繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。

    大鼠睪酮（T）ELISA試劑盒原理試劑盒性能

    1.準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。

    2.靈敏度：檢測(cè)濃度小于1.0pg/mL。

    3.特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類(lèi)似物交叉反應(yīng)。

    4.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

    5.貯藏：2-8℃，避光防潮保存。