技術文獻
AMPPD 發光顯色試劑盒
產品簡介：
AMPPD 是堿性磷酸酶的化學發光底物，在適宜的緩沖液中，隨著酶的催化水解作用，
AMPPD 分解成 AMP-D，后者發出強度很高的光信號，其發光的速度取決于堿磷酶的濃度。
當堿磷酶偶合到雜交的探針時，便可以通過此系統檢測到雜交分子的存在量。乙醇胺可使光信號輸出更理想。AMPPD 為 1，2-二氧環已烷衍生物，它是一種生物化學領域中*新的超
靈敏的堿性磷酸酶底物，其特點：反應速度快，在很短時間內提供正確可靠的結果。在它的
分子結構中有兩個重要部分，一個是聯接苯環和金剛烷的二氧四節環，它可以斷裂并發射光子；另一個是磷酸根基團，它維持著整個分子結構的穩定。在通常情況下，這種化合物很穩定。但是，結果有堿性磷酸酶存在，Dioxetane Phosphate 作為酶的底物會在酶的催化一
脫去磷酸根基團，形成一個不穩定的中間體。 這個中間體隨即自行分解 （二氧四節環斷裂） ，同時發射光子。
AMPPD 發光顯色試劑盒適用于 PVDF 膜，不推薦用于硝酸纖維素膜。
產品組成：
| 名稱 規格 |
25T |
50T |
Storage | |
| 試劑（A）: Dioxetane Buffer | A1: Dioxetane A | 50ml | 100ml | -20℃ |
| A2: Dioxetane B | 50ml | 100ml | -20℃ | |
| 臨用時，取 A1、A2 等量混合，即為 Dioxetane Buffer，不可預先配制。 | ||||
| 試劑（B）: AMPPD | 2.5mg | 5mg | 避光 | |
| 使用說明書 | 1份 | |||
自備材料：
2、Tris 鹽緩沖液（TBS）
3、透明的塑料保鮮膜
4、蒸餾水
操作步驟（僅供參考）：
1、 臨用前，取適量的 A1 和 A2，等量混合后獲得 Dioxetane Buffer。
2、 按 2.5mgAMPPD 溶于 25ml Dioxetane Buffer, 配制 0.1mg/ml AMPPD 底物溶液即
為 AMPPD Dioxetane Buffer（發色發光顯跡液），用于膜的染色。
3、 取適量 Dioxetane Buffer 洗膜兩次，每次 15min。
4、 對于 PVDF 膜進行的堿性磷酸酶反應, 膜置于新鮮配制的 AMPPD Dioxetane Buffer
作用 5min。
5、 將膜移入適量的 AMPPD Dioxetane Buffer 中，浸泡 5min（AP 反應）。
6、 取出 PVDF 膜，滴干水分，將膜正面朝下放在一張透明的塑料保鮮膜上，向后折疊將膜
包裹起來，成為不漏水的封閉體。
7、 在暗房中，將膜正面朝下放在感光膠片上，曝光數秒至數小時。
8、 如需要，在室溫下以適量的 TBS 洗膜 15min。
9、 將膜放入 AMPPD Dioxetane Buffer，條帶應在 10~30min 內出現。
10、用蒸餾水洗膜，終止反應。晾干后拍照留永久的記錄。
注意事項：
1、 PVDF 膜置于膠片上后，不要改變位置。
2、 曝光時間應根據實驗情況，自行摸索。
3、 配制好的 AMPPD Dioxetane Buffer，應避光低溫保存。
4、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
有效期： 12 個月有效。
原創作者：上海遠慕生物科技有限公司
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