在分子生物學(xué)中，電泳實(shí)驗(yàn)是核酸的分離、純化及蛋白識(shí)別的有效方法，可以與凝膠成像系統(tǒng)配合使用，也可以單獨(dú)使用，具體根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康膩?lái)選擇。瓊脂糖凝膠電泳是通過(guò)DNA/片段在瓊脂糖介質(zhì)電場(chǎng)中的電泳速率大小來(lái)判斷 DNA分子量的大小的實(shí)驗(yàn)方法。
瓊脂糖凝膠中常用的染料有哪些？
1.溴化乙錠 ：溴 化乙錠通常習(xí)慣簡(jiǎn)稱“EB”，是核酸染色及凝膠成像分析中普遍使用的染料。
EB染料屬于核酸分子嵌入型染色劑，且具有DNA誘導(dǎo)突變的作用。研究發(fā)現(xiàn)，長(zhǎng)/期使用溴化乙錠或長(zhǎng)/期處在含溴化乙錠的實(shí)驗(yàn)環(huán)境中，會(huì)對(duì)人體造成較大的傷害，甚至增加遺傳方面的致畸率 。所以在實(shí)驗(yàn)室中，使用EB類染料時(shí)要做好全套防護(hù)，實(shí)驗(yàn)后的廢液、耗材等也要嚴(yán)格管理，切勿隨意丟棄，以防對(duì)他人造成間接傷害。
2.吖啶橙染料：吖啶橙染料（Goldview）主要用于RNA 染色、熒光染色以及細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)等，從理論上講雖然Goldview染料的毒性遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于 EB，但是在實(shí)驗(yàn)室也不可粗心大意。
3.GelGreen熒光染料與 Gelred核酸染料
GelRed 和GelGreen 都屬于熒光核酸染料，其中Biotium的市場(chǎng)份額較大，在化學(xué)發(fā)光、凝膠成像、電泳等相關(guān)實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用較為普遍。 由于Gelred和GelGreen的分子量較大，且具有特殊的油性分子，很難滲透細(xì)胞膜進(jìn)入動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)，所以這種染料相對(duì)較為安全，實(shí)驗(yàn)后的廢棄物對(duì)周邊環(huán)境的危害性也較小，可放心使用。
4.SYBR Green染料 和SYBR Gold染料
SYBR Green與SYBR Gold具有靈敏度好，成本低廉，毒性低，信噪比較高，并且實(shí)驗(yàn)時(shí)無(wú)需進(jìn)行洗脫操作等特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于凝膠電泳分析實(shí)驗(yàn)中。但是作為花箐素類核酸染料其穩(wěn)定性較差，在一定光誘導(dǎo)下也會(huì)產(chǎn)生強(qiáng)誘變力，易造成DNA序列上的基因位點(diǎn)突變。
常用的這幾種核酸染料相信每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都使用過(guò)，但是對(duì)于核酸染料的危害也要注意，實(shí)驗(yàn)中做好實(shí)驗(yàn)防護(hù)也很關(guān)鍵。
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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