昆蟲細胞桿狀病毒載體表達系統是一種真核表達系統，可以在昆蟲細胞中表達真菌、細菌、病毒和植物在內的多種外源基因。粉紋夜蛾H5（high five）細胞系、草地貪夜蛾卵巢細胞系（sf21），或由sf21細胞克隆得到的sf9細胞都是在生物制品域中常用的昆蟲細胞，通常用于使用桿狀病毒載體表達系統的重組
蛋白表達。
作為地球上生物多樣性較高的種群，昆蟲細胞有許多特化的器官和系統，在顯微鏡下昆蟲細胞為晶瑩透亮、大小均一的圓形細胞，使用含有或不含有血清培養基可在體外進行懸浮培養及貼壁培養，但是體外培養的昆蟲細胞容易受PH、溶氧量、培養液成分、濃度、代謝產物及細胞本身的生化代謝等外界環境的影響。從親代粉紋夜蛾胚胎細胞系分離得到的克隆——High Five細胞系，是一種應用于桿狀病毒載體表達系統的表達重組蛋白的細胞株，它具有細胞數目倍數少于24h、貼壁生長良好、能夠懸浮培養于無血清培養基中和比在sf9細胞中蛋白表達量要高5~10倍等特點。
有研究者檢測了High Five昆蟲細胞系對BALB/c裸鼠致瘤性情況，以確保其作為疫苗生產細胞株的安全性[1]。裸鼠成瘤實驗是腫瘤研究中常規的動物實驗，可以采用免疫缺陷型小鼠如裸鼠來作為移植瘤模型的載體，通過對該小鼠的注射腫瘤細胞，使其成瘤，觀察流體的生長來判斷其生物學變化。美迪西根據客戶的需求提供各種有效的動物模型，用來檢測藥物的有效性。實驗動物有非人類靈長動物、狗、小鼠、大鼠、家兔、豚鼠、裸鼠等各種種類。目，已經建立多個有效動物腫瘤模型，并經過多方驗證和長/期實踐考驗。
研究者將裸鼠隨機分為 5 組，分別為High Five基礎細胞庫細胞試驗組、High Five/高限制代次細胞試驗組、HEp-2細胞陽性對照組、CEF細胞陰性對照組和不作任何處理的空白對照組，用細胞懸液背部皮下接種裸鼠[1]。3周和12周后對裸鼠解剖及病理組織學檢查，其是否有腫瘤形成。研究結果發現陽性對照HEp-2細胞組裸鼠接種后3周注射部位形成結節，病理組織學檢查為鱗狀細胞癌；陰性對照CEF細胞組和High Five細胞組均無結節形成，接種后12周經解剖用病理組織學檢查，均無腫瘤形成。結果發現基礎代次和/高限制代次High Five細胞均不具有致瘤性，可安全地應用于疫苗生產。
還有研究者利用桿狀病毒-昆蟲表達系統成功制備了具有一定促凝血活性的重組人凝血因子rhFⅧ，為人凝血因子Ⅷ進一步的開發及應用奠定了基礎[2]。研究者克隆了人凝血因子Ⅷ（rhFⅧ）基因cDNA，利用bac-to-bac桿狀病毒表達系統制備具有高凝血活性rhFⅧ。方法是利用PT-PCR和overlap PCR技術擴增人FⅧ基因，亞克隆至轉移載體pFastBac HTB，進一步轉化至感受態細菌DH10Bac（含穿梭載體Bacmid）中，同源轉座、氨芐青霉素及藍白斑篩選陽性克隆質粒Bacmid/rhFⅧ；PCR法鑒定重組質粒后轉染昆蟲細胞Sf9；利用病毒感染High five細胞進行蛋白表達，通過SDS-PAGE、Western blot及凝血活性檢測方法分析蛋白表達。
結果完成了rBac-rhFⅧ重組桿狀病毒的制備，實現了rhFⅧ在昆蟲細胞中的重組表達，rhFⅧ相對分子質量為184 kDa左右，SDS-PAGE和Western blot檢測結果與預期一致，同時具有良好的促凝血作用。
High Five細胞不僅僅是昆蟲細胞，它還可以作為桿狀病毒載體表達系統的常用細胞系。而目對于桿狀病毒載體表達系統的研究及應用也是生物技術的重要域，應用該系統表達外源基因，不僅經濟高/效，而且可能提供一條新的技術途徑。
原創作者：上海遠慕生物科技有限公司
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